[发明专利]AUDG介导的多交叉置换扩增结合生物传感的核酸检测技术

摘要

本发明公开了一种多交叉恒温扩增结合高分子纳米生物传感检测目的基因的方法，所述方法在多交叉置换扩增中的交叉引物CP1或CP2的5’端标记半抗原，在扩增系统中引入南极热敏尿嘧啶脱氧核酸糖基化酶和生物素化的脱氧尿嘧啶，以多交叉置换扩增技术为基础，结合高分子纳米生物传感检测扩增产物。所述方法针对HPV16型的E7基因或者HPV18型的L1基因的扩增产物能被高分子纳米生物传感器可视化检测。所述方法便捷、快速、敏感、特异，适宜于各种核苷酸片段检测。

主权项

一种多交叉恒温扩增结合高分子纳米生物传感检测目的基因的方法，所述方法包括以下步骤：(1)提取待检测样品的基因组；(2)提供第一套引物：置换引物F1和F2，所述置换引物F1的序列如SEQ ID NO:1所示，所述置换引物F2的序列如SEQ ID NO:2所示；提供交叉引物CP1和CP2，所述交叉引物CP1的序列如SEQ ID NO:3所示，所述交叉引物CP2的序列如SEQ ID NO:6所示；同时提供在交叉引物CP1或CP2的5’端标记有半抗原的交叉引物CP1*或CP2*；提供扩增引物C1和C2，D1和D2，R1和R2，引物C1的序列如SEQ ID NO:7所示，引物C2的序列如SEQ ID NO:8所示；引物D1的序列如SEQ ID NO:9所示，引物D2的序列如SEQ ID NO:10所示，引物R1的序列如SEQ ID NO:11所示，引物R2的序列如SEQ ID NO:12所示，和/或提供第二套引物：置换引物F1和F2，所述置换引物F1的序列如SEQ ID NO:13所示，所述置换引物F2的序列如SEQ ID NO:14所示；提供交叉引物CP1和CP2，所述交叉引物CP1的序列如SEQ ID NO:15所示，所述交叉引物CP2的序列如SEQ ID NO:18所示；同时提供在交叉引物CP1或CP2的5’端标记有半抗原的交叉引物CP1*或CP2*；提供扩增引物C1和C2，D1和D2，R1和R2，引物C1的序列如SEQ ID NO:19所示，引物C2的序列如SEQ ID NO:20所示；引物D1的序列如SEQ ID NO:21所示，引物D2的序列如SEQ ID NO:22所示，引物R1的序列如SEQ ID NO:23所示，引物R2的序列如SEQ ID NO:24所示；(4)在南极热敏尿嘧啶脱氧核酸糖基化酶、链移位型聚合酶、解链温度调节剂、引物、常规的dNTP，以及生物素化的脱氧尿嘧啶存在下，使用待检测样品的基因组核酸作为模板恒温扩增DNA；(5)使用高分子纳米生物传感器检测步骤(4)的扩增产物。