[发明专利]一种鉴定西花蓟马对多杀菌素抗性的分子检测方法

摘要

本发明涉及蔬菜害虫的分子鉴定技术，特别涉及一种鉴定西花蓟马对多杀菌素抗性的分子检测方法。步骤为：随机捕捉20～50头待测种群西花蓟马，提取总RNA并反转录为cDNA；用nAChR a6亚基全长基因的特异性引物进行PCR；将PCR产物与克隆载体连接，转化大肠杆菌，挑选阳性克隆测序；统计缺失nAChR a6亚基基因编码序列的阳性克隆数，除以测序的阳性克隆数，计算nAChR a6亚基缺失型比例x；获取“nAChR a6亚基缺失型比例－抗性倍数”标准曲线方程；将nAChR a6亚基缺失型比例x代入标准曲线方程，计算y，即可获得待测种群对多杀菌素的抗性水平。该方法具有快速、便捷、准确的优点。

主权项

一种鉴定西花蓟马对多杀菌素抗性的方法，其特征在于，步骤如下：(1)随机捕捉20～50头待测种群的西花蓟马，提取总RNA并反转录为cDNA；(2)以所述cDNA为模板，用西花蓟马烟碱型乙酰胆碱受体nAChR a6亚基全长基因的特异性引物进行PCR，得到PCR产物；(3)将所述PCR产物与克隆载体进行连接，然后转化大肠杆菌，挑选阳性克隆进行测序；(4)对测序结果进行分析，统计缺失nAChR a6亚基基因编码序列的阳性克隆数，以其为分子，以测序的阳性克隆数为分母，计算得到待测种群的nAChR a6亚基缺失型比例x；(5)获取“nAChR a6亚基缺失型比例－抗性倍数”的标准曲线方程，其横坐标x为以西花蓟马已知种群为系列待测样品，按照步骤(1)－(4)的方法测得的nAChR a6亚基缺失型比例，纵坐标y为所述西花蓟马已知种群对多杀菌素的抗性倍数以10为底的对数；(6)将步骤(4)计算得到的待测种群的nAChR a6亚基缺失型比例x代入所述“nAChRa6亚基缺失型比例－抗性倍数”的标准曲线方程中，计算y的值，即得到待测种群对多杀菌素的抗性倍数以10为底的对数；y的值越大，则待测种群对多杀菌素的抗性越高；所述抗性倍数是指多杀菌素对待测种群的半数致死浓度除以多杀菌素对敏感种群的半数致死浓度所得的商。