[发明专利]孕鼠胎盘血管平滑肌细胞的分离及传代方法

摘要

本发明提供了一种孕鼠胎盘血管平滑肌细胞的分离及传代方法。其步骤为取孕鼠胎盘，预处理后注入含有琼脂糖、四氧化三铁、无血清的DMEM F12培养基和青霉素链霉素的混合液，待凝结后将胎盘剪碎，在磁力作用下吸附含铁的胎盘组织，用胶原酶II溶液重悬，酶消化后加入DMEM F12完全培养基钝化胶原酶II，洗涤后再加入DMEM F12完全培养基重悬，得到的组织块在贴壁生长后长出血管平滑肌细胞，进行传代培养。本发明提供的孕鼠胎盘血管平滑肌细胞的分离及传代方法与传统方法相比，能够简便高效的提取胎盘血管平滑肌细胞，整个过程不需要把血管游离出来，操作更加简单，减少了组织暴露于空气中的时间，降低了细胞污染的风险。

主权项

一种孕鼠胎盘血管平滑肌细胞的分离方法，其包括以下步骤：将孕鼠胎盘置于预冷的PBS液中，从脐带血管打入PBS液以冲洗胎盘血管残存的血液；按照琼脂糖、四氧化三铁、无血清的DMEM F12培养基和青霉素链霉素以(0.05g‑2g)：(0.05g‑2g)：(9.9mL‑100mL)：(0.1mL‑5mL)的比例称取并混合煮沸得到琼脂糖混合液，将琼脂糖混合液打入脐动脉，然后将胎盘置入冰冷的PBS液中，从而使琼脂糖混合液凝固；去除胎盘脐带及胎盘外包绕的结缔组织，并将胎盘剪成碎块；将胎盘碎块置入含有冰冷的PBS液的培养管中，并将培养管固定于磁力架上，使含铁的胎盘组织吸附至管内侧壁；在磁力作用下，用冰冷的PBS液洗涤被吸附的含铁的胎盘组织，然后用胶原酶II溶液重悬含铁的胎盘组织；培养用胶原酶II溶液重悬的含铁的胎盘组织以消化血管外连带组织，然后于磁力作用下吸附含铁组织至培养管内侧壁，然后加入DMEM F12完全培养基钝化所吸附组织中的胶原酶II，并用PBS液洗涤，接着加入DMEM F12完全培养基重悬，重悬后的组织块经贴壁生长后得到孕鼠胎盘血管平滑肌细胞。