[发明专利]一种青贮用包埋菌剂及其生产方法

摘要

本发明涉及一种青贮用包埋菌剂及其生产方法，该包埋菌剂由含有产酯酵母和植物乳杆菌的菌剂A与枯草芽孢杆菌菌剂B按照重量比2.5～3.5：1组成。本发明制备的青贮饲料无论在饲料本身的营养上，还是在有效保质期上均超过市售菌剂，所以本发明提高了玉米秸秆的利用率，改善了青贮饲料的营养价值，具有良好的应用前景。

主权项

1.一种青贮用包埋菌剂，其特征在于该包埋菌剂由含有产酯酵母和植物乳杆菌的菌剂A与枯草芽孢杆菌菌剂B按照重量比2.5～3.5：1组成，该包埋菌剂含有2.5～3.5×10⁸个/g枯草芽孢杆菌、6.0～7.0×10⁸个/g产酯酵母与2.0～2.6×10⁹个/g植物乳杆菌；所述的枯草芽孢杆菌选自Bacillus subtilis strain B48，CICC No.10089、Bacillus subtilisstrain B49，CICC No.10090或Bacillus subtilis strain WL1021，CICC No.10063；所述的产酯酵母选自Pichia anomala，CCTCC No.CICIM Y0297、Candida sp.，CICC No.1257或Brettanomyces sp.，CCTCC No.AY 93142菌株；所述的植物乳杆菌选自Lactobacillusplantarum strain F1，CCTCC No.CCREM SDMCC 050029、Lactobacillus plantarum A15，CICC No.21814或Lactobacillus plantarum Y15118，CICC No.20768菌株；/n所述青贮用包埋菌剂的生产方法的步骤如下：/nI、产酯酵母培养液制备：/n制备具有下述组成的摇瓶培养基：20g/L蛋白胨、20g/L葡萄糖与10g/L酵母浸膏；/n将选自Pichia anomala、Candida sp.或Brettanomyces sp.的产酯酵母菌株按照1％接种量接种于在温度110～120℃下灭菌8～12min的摇瓶培养基中，在摇瓶中在温度30℃条件下培养24～36h，得到含有2.0～2.5×10⁸个/g产酯酵母的摇瓶培养液；/n制备具有下述组成的发酵培养基：10g/L蛋白胨、10g/L葡萄糖与5g/L氯化钠；/n按照3％接种量将上述摇瓶培养液接种于在温度110～120℃下灭菌8～12min的发酵培养基中，在发酵罐中在温度30～32℃条件下培养36～48h，得到含有6.4～6.8×10⁸个/g产酯酵母的发酵培养液；/nII、植物乳杆菌培养液制备：/n制备具有下述组成的摇瓶培养基：10g/L牛肉膏、10g/L蛋白胨、10g/L酵母膏、5g/L葡萄糖、20g/L醋酸钠、5g/L磷酸氢二钾、2g/L柠檬酸二铵、2g/L吐温80、1g/L硫酸镁与0.58g/L硫酸锰；/n将选自Lactobacillus plantarum strain F1、Lactobacillus plantarum A15或Lactobacillus plantarum Y15118的植物乳杆菌菌株按照1％接种量接种于在温度110～120℃下灭菌8～12min的摇瓶培养基中，在摇瓶中在温度30℃条件下培养48～72h，得到含有5.0～5.5×10⁸植物乳杆菌的摇瓶培养液；/n制备具有下述组成的发酵培养基：20g/L蛋白胨、10g/L酵母膏、5g/L葡萄糖、0.008g/L氯化钠、0.008g/L磷酸氢二钾、2g/L柠檬酸二铵、0.008g/L硫酸镁与0.008g/L硫酸锰；/n按照3％接种量将上述摇瓶培养液接种于在温度110～120℃下灭菌8～12min的发酵培养基中，在发酵罐中在温度30～32℃条件下培养60～72h，得到含有2.2～2.4×10⁹个/g植物乳杆菌的发酵培养液；/nIII、枯草芽孢杆菌培养液制备：/n制备具有下述组成的摇瓶培养基：5g/L羧甲基纤维素钠、2g/L硫酸铵、1g/L磷酸氢二钾、0.5g/L氯化钠与0.5g/L硫酸镁；/n将选自Bacillus subtilis strain B48、Bacillus subtilis strain B49或Bacillussubtilis strain WL1021的枯草芽孢杆菌菌株按照1％接种量接种于在温度110～120℃下灭菌8～12min的摇瓶培养基中，在摇瓶中在温度30℃条件下培养24～36h，得到含有7.5～8.0×10⁷个/g枯草芽孢杆菌的摇瓶培养液；/n制备具有下述组成的发酵培养基：5g/L羧甲基纤维素钠、2g/L硫酸铵、1g/L磷酸氢二钾、0.5g/L氯化钠与0.5g/L硫酸镁；/n按照3％接种量将上述摇瓶培养液接种于在温度110～120℃下灭菌8～12min的发酵培养基中，在发酵罐中在温度30～32℃条件下培养36～48h，得到含有2.5～3.5×10⁸个/g枯草芽孢杆菌的发酵培养液；/nIV、植物秸秆预处理/n将植物秸秆粉碎，筛分，收集植物秸秆粉，再使用饱和水蒸汽处理1.0～1.5h，接着冷却至室温，得到灭菌植物秸秆粉；所述的植物秸秆是玉米秸秆、高粱秸秆、小麦秸秆或水稻秸秆；/nV、菌剂制备/n菌剂A的制备：/n将步骤I得到的产酯酵母发酵培养液与步骤II得到的植物乳杆菌发酵培养液按照体积比1：1.0～1.5混合均匀，按照灭菌植物秸秆粉干重计1.0～5.0％接种量，把混合均匀的发酵培养液加到灭菌植物秸秆粉中，在摇床中震荡8h，离心清洗，得到吸附产酯酵母与植物乳杆菌的载体；/n将以混合溶液重量计6％聚乙烯醇、0.3％海藻酸钠与0.3％羧甲基纤维素钠在去离子水中浸泡一夜，在温度121℃的条件下灭菌20min，接着冷却至温度40℃，得到一种混合溶液；/n将所述载体与所述混合溶液按照重量比10：1混合，再滴入pH6.0～6.8的含有以重量计4％CaCl₂的饱和硼酸溶液中，静置24h，得到菌剂A；/n菌剂B的制备：/n将步骤III得到的枯草芽孢杆菌发酵培养液、按照枯草芽孢杆菌发酵培养液重量计6％海藻糖与15％脱脂乳混合均匀，再置于冷冻干燥设备中处理得到所述的菌剂B；/n将菌剂A与菌剂B按照重量比2.5～3.5：1混合均匀，得到所述的包埋菌剂。/n