[发明专利]一种树兰组培繁育方法

摘要

本发明属于植物组织培养技术领域，具体涉及一种树兰的组培繁育方法，采用花梗作为外植体的组培快繁技术。一种树兰的组培繁育方法，包括如下步骤(1)花梗预处理；(2)花梗灭菌处理；(3)萌发诱导阶段；(4)继代增殖阶段；(5)壮苗生根阶段；(6)炼苗阶段和(7)移栽。本发明的树兰组培快繁方法能快速获得大量无菌苗，具有污染率较低，灭菌难度低、诱导率高、诱导时间短、丛生芽增殖率高、技术难度低、遗传性能稳定的优点，可避免生产中发生大量变异，对大规模生产具有重要意义。

主权项

一种树兰的组培繁育方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)花梗预处理：选取绿色，无病虫害的花梗，用毛刷刷干净花梗表面的杂质，用75％酒精棉球擦洗花梗段，剪刀剪成带1‑2个芽，3‑7cm长的花梗段，然后用饱和洗衣粉水浸泡15‑20min，流水冲洗20‑30min；(2)花梗灭菌处理：在超净工作台上，将花梗段放入0.1％升汞中浸泡13‑18min，然后用无菌水洗4‑5次，在接种盘中，用手术刀慢慢刮去花梗上包住腋芽的苞片，不能弄伤腋芽，然后在放入0.1％升汞中浸泡5‑8min，进行第2次灭菌，无菌水洗4‑5次，最后在接种盘中，切掉花梗段两端0.5cm，按生长方向垂直插入诱导培养基中，培养基不能没过腋芽；(3)萌发诱导阶段：在诱导培养基培养10d后，腋芽开始伸长生长，60d后，腋芽可长至4‑5cm，长出4‑5片叶片；(4)继代增殖阶段：取出腋芽，从基部切离原母株，切去叶片，切掉顶芽，剩余的茎段接入继代增殖培养基中培养60d后，单芽变壮，且从茎段基部长出许多小芽，增殖倍数达3‑5倍；(5)壮苗生根阶段：将丛生芽取出，把高于1.5cm的小芽切出，接入壮苗生根培养基中培养60d后，单芽伸长生长成健壮小苗，长出3‑5条根，低于1.5cm的小丛芽再继续接入继代增殖培养基中；(6)炼苗阶段：当生根苗根长1.5‑2.0cm，苗高5‑9cm，叶片数6‑8片时，移至温棚内炼苗14d，然后除去瓶盖继续炼苗1‑2d；(7)移栽：移栽时，先用清水洗去粘附于苗上的培养基，在荫棚下晾5min，用口径5cm带孔小杯种植，并放置于四槽托内，每杯种植2‑3株，将小苗种植在移栽基质正中，轻压根部，淋透定根水；移栽10d后，用水溶性促根肥2000‑3000倍浓度喷洒叶面，以叶面稍有水珠形成为度；栽植1‑3个月内，与水溶性均衡肥2000‑3000倍浓度轮流喷洒，每3d喷洒1次，喷肥在晴天午后进行。