[发明专利]一种南瓜抗坏血酸氧化酶的提取纯化方法

摘要

本发明公开一种南瓜抗坏血酸氧化酶的提取纯化方法，将青皮南瓜洗净后加入食盐，再粉碎得到粉碎液；将粉碎液经固液分离，所得分离液用板框过滤得到澄清液；在所得澄清液中加入所得吸附颗粒，搅拌后，经固液分离得到清液，再经浓缩、灭菌、干燥，即得干燥的抗坏血酸氧化酶。本发明能有效去除叶绿素，提高抗坏血酸氧化酶产品的纯度。生产过程中产物易与水分离，便于按需要的活性获得浓缩液，且灭菌效果好，产品合格率高。本发明工艺条件温和，方法简便，生产成本低，过程易于控制，对设备要求低，能耗低。本发明所得抗坏血酸氧化酶产品收率达80％以上，纯度达99％以上。

主权项

一种南瓜抗坏血酸氧化酶的提取纯化方法，其特征在于经过下列各步骤：(1)将青皮南瓜洗净后削皮，以瓜皮为原料，加入瓜皮质量1～3％的食盐，再按固液质量比为1：2加水混合后粉碎，得到粉碎液；(2)将步骤(1)所得粉碎液经固液分离，所得分离液用醋酸调节pH值至5.0，再用板框过滤得到澄清液；(3)按水：乙醇：纳米级硫酸铜：氨水的体积比为40～60：2～10：25～45：2～10，将氨水、乙醇、水和纳米级硫酸铜混合后，在室温下搅拌10～16小时，再加入硝酸溶液调节pH值为4～6，并继续搅拌70～120分钟，经离心清洗后，即得到表面改性的微球；将所得表面改性的微球超声分散到0.01mol/L的硝酸溶液中，在搅拌情况下，按微球质量的0.05～1％加入聚乙二醇‑4000，然后按微球质量的2～50倍加入柠檬酸，搅拌30～90分钟以上，用去离子水离心沉积和超声分散循环的清洗方式，去除所得微球的反应残余物，即得到吸附颗粒；(4)按固液比mg/L计为1：4～10，在步骤(2)所得澄清液中加入步骤(3)所得吸附颗粒，搅拌60～120分钟后，经固液分离得到清液；(5)浓缩：用8000K～10000K的卷式膜浓缩机浓缩，按需要的活性确定浓缩倍数，即可得到浓缩液；(6)灭菌：用0.45u孔径的膜过滤机把细菌过滤掉，得到无菌浓缩液；(7)干燥：用冷冻真空干燥机把无菌的浓缩液冻干即得干燥的抗坏血酸氧化酶。