[发明专利]猪GM‑CSF蛋白的制备方法及其注射液和应用在审
| 申请号： | 201710343196.8 | 申请日： | 2017-05-16 |
| 公开（公告）号： | CN107188951A | 公开（公告）日： | 2017-09-22 |
| 发明（设计）人： | 钱泓;吴有强;张强;徐玉兰;闻雪;姜冰洁;白志军;查银河;江海 | 申请（专利权）人： | 浙江海隆生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C07K14/535 | 分类号： | C07K14/535;C12N15/70;A61K38/19;A61K39/39;A61P37/04 |
| 代理公司： | 北京乾诚五洲知识产权代理有限责任公司11042 | 代理人： | 付晓青,李广文 |
| 地址： | 312000 浙江省绍兴市*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种猪GM‑CSF蛋白的制备方法及其注射液和应用，该方法包括以下步骤1)将密码子优化后的猪GM‑CSF基因序列克隆到原核表达质粒中，得到重组质粒；2)将步骤1)中重组质粒转化大肠杆菌，得到阳性克隆；3)将步骤2)中阳性克隆进行发酵，诱导表达含有伴侣蛋白及相应酶切位点的猪GM‑CSF重组融合蛋白，得到含有伴侣蛋白及相应酶切位点的猪GM‑CSF重组融合蛋白；4)纯化步骤3)中猪GM‑CSF重组融合蛋白；5)使用能够切开所述猪GM‑CSF重组融合蛋白中酶切位点的蛋白酶对纯化后的猪GM‑CSF重组融合蛋白进行酶切，得到酶切液；以及6)从步骤5)中的酶切液中纯化得到猪GM‑CSF蛋白。使用本发明的方法在制备猪GM‑CSF蛋白时具有产量高、易于纯化、成本低、适合大规模生产等优点，且本发明的注射液在治疗病猪时有非常好的疗效。 | ||
| 搜索关键词： | gm csf 蛋白 制备 方法 及其 注射液 应用 | ||
【主权项】：
一种制备猪GM‑CSF蛋白的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：1)将密码子优化后的猪GM‑CSF基因序列克隆到原核表达质粒中，得到重组质粒；所述原核表达质粒为可低温诱导表达目的蛋白且含有伴侣蛋白基因序列的质粒，所述克隆时在伴侣蛋白基因序列后面添加一种蛋白酶的酶切位点的基因序列；2)将步骤1)中所述重组质粒转化大肠杆菌，得到阳性克隆；3)将步骤2)中所述阳性克隆进行发酵，诱导表达含有伴侣蛋白及相应酶切位点的猪GM‑CSF重组融合蛋白，得到含有伴侣蛋白及相应酶切位点的猪GM‑CSF重组融合蛋白；4)纯化步骤3)中猪GM‑CSF重组融合蛋白；5)使用能够切开所述猪GM‑CSF重组融合蛋白中酶切位点的蛋白酶对纯化后的所述猪GM‑CSF重组融合蛋白进行酶切，得到酶切液；以及6)从步骤5)中的酶切液中纯化得到猪GM‑CSF蛋白。
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