[发明专利]一种高浓度人间充质干细胞提取物及其制备方法

摘要

本发明公开了一种高浓度人间充质干细胞提取物及其制备方法，采用连续饥饿间充质干细胞的方法,在较短时间内就能得到高浓度的间充质提取物,为间充质干细胞提取物应用提供快捷有效的获得方法。本发明将细胞进行饥饿培养，使得细胞分泌的各种活性成分的浓度都得到了提高，并且在短时间内使用饥饿上清重复饥饿间充质干细胞，使细胞提取物浓度进一步增加。而高浓度的间充质干细胞提取物为干细胞提取物提供了高效的制备方法。

主权项

一种高浓度人间充质干细胞提取物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)人间充质干细胞培养：从细胞库中选取P2‑P6的人间充质干细胞复苏，接种批次记为第一批次、第二批次、第三批次，接种密度分别为最大融合度的50％‑60％、35％‑45％、20％‑30％；细胞接种完成，放于二氧化碳培养箱培养，温度37℃，二氧化碳体积比浓度5％；(2)第一批次细胞融合度达到70％‑80％时，以生理盐水清洗细胞2次，用复方电解质注射液进行饥饿培养；(3)饥饿培养12‑24小时后，第一批次细胞融合度达90％‑95％，收取细胞培养上清，3000‑4500g条件下离心5‑8min除去沉淀，取离心后上清备用；(4)取培养的第二批次细胞，当细胞融合度达到70％‑80％，以生理盐水清洗第二批次细胞2次，用步骤(3)中细胞培养上清进行饥饿培养；(5)饥饿培养12‑24小时后，第二批次细胞融合度达90％‑95％，收取细胞培养上清，3000‑4500g条件下离心5‑8min除去沉淀，取离心后上清备用；(6)取培养的第三批次细胞，当细胞融合度达到70％‑80％，以生理盐水清洗第三批次细胞2次，用步骤(5)中细胞培养上清进行饥饿培养；(7)饥饿培养12‑24小时后，第三批次细胞融合度达90％‑95％，收取细胞培养上清，3000‑4500g条件下离心5‑8min除去沉淀，取离心后上清，得到高浓度间充质干细胞提取物。