[发明专利]一种结合瓶外生根技术的泡桐组培快繁方法

摘要

本发明公开了一种结合瓶外生根技术的泡桐组培快繁方法，包括外植体处理、初始芽诱导培养、继代芽增殖培养、育苗基质准备、继代芽移植和移植后管理；选取生长健壮无病虫害的泡桐半木质化枝条，对枝条进行修剪成茎段作为外植体，对外植体灭菌消毒处理后接种于初始芽诱导培养基中获取初始芽，再将初始芽接种于继代培养基中后得到组培继代芽，单个切下生长健壮，高度≥2.5cm的继代芽移植于育苗基质中，经过移植后管理得到泡桐苗木。本发明方法简单可行，简化了流程，缩短了育苗周期，从初始芽诱导至苗木移植后成活最短45天即可实现，加快了苗木培育的速度，提高了生产效率，节约了成本，具有较好的经济效益、社会效益和生态效益。

主权项

1.一种结合瓶外生根技术的泡桐组培快繁方法，其特征在于：包括外植体处理、初始芽诱导培养、继代芽增殖培养、育苗基质准备、继代芽移植和移植后管理；选取生长健壮无病虫害的泡桐半木质化枝条，对枝条进行修剪成茎段作为外植体，对外植体灭菌消毒处理后接种于初始芽诱导培养基中获取初始芽，再将初始芽接种于继代培养基中后得到组培继代芽，单个切下生长健壮，高度≥2.5cm的继代芽移植于育苗基质中，经过移植后管理得到泡桐苗木；主要操作步骤如下：（1）外植体处理：选取生长健壮无病虫害的泡桐半木质化枝条，用常规的消毒液对枝条进行表面消毒，然后修剪成茎段作为外植体，软纱布轻轻擦洗茎段表面，置于质量浓度为1%洗衣粉溶液浸泡5min，用流水冲洗5min；然后置于超净工作台上，用体积浓度为75%的乙醇溶液对外植体浸泡30s，用无菌水清洗5~6遍；再用体积浓度为0.1%氯化汞溶液浸泡外植体5~10min进行消毒，用无菌水清洗5~6遍；在每一次浸泡期间不断进行搅动；（2）初始芽诱导培养：将步骤（1）处理后的外植体两端分别剪除1~2mm，接种到诱导培养基上诱导初始芽；（3）继代芽增殖培养：将步骤（2）获得的初始芽接种于继代培养基上进行增殖培养，得到组培继代芽；（4）育苗基质准备：将配制好的育苗基质经过杀菌处理后装入规格8 cm×8 cm无纺纸育苗容器中；（5）继代芽移植：单个切下生长健壮，高度≥2.5cm的继代芽，用清水洗去培养基，将单芽的切端蘸于生根剂后，移植于育苗容器中，压紧，清水淋透育苗基质；（6）移植后管理：在摆有育苗容器的育苗床上方用塑料薄膜搭建小拱棚，再盖上遮荫度为75～85%的遮阴网，每3天淋施一次激素溶液，直至完全生根为止；移植10～15天后选阴天拆除小拱棚；每周用喷雾器补充水分3～5次，使育苗床湿度保持75%以上；移植18～21天后每半月喷洒一次600～800倍的50%退菌特；移植25天后每3周喷一次FA旱地龙500倍液的叶面肥；移植后管理期间光照强度1500～2500 lx，光照12～14h/d；步骤（1）中所述的茎段长3.0～5.0 cm，至少带有一个腋芽；步骤（2）中所述的诱导培养基的原料组分和质量含量为∶改良MS + 6‑BA 2.0~4.0 mg/L + IBA 1.0~2.0 mg/L +蔗糖30000 mg/L + 琼脂3000 mg/L；所述的改良MS培养基的组成为：KNO3 1600 mg/L；NH4NO3 1500 mg/L；CaCl2·2H2O 220 mg/L；MgSO4·7H2O 370 mg/L；KH2PO3 100 mg/L；Ca(NO3)2 450 mg/L；MnSO4·4 H2O 25 mg/L；ZnSO4·7 H2O 10 mg/L；CuSO4·5 H2O 0.025 mg/L；H3BO3 6.2 mg/L；Na2MoO4·2 H2O 0.025 mg/L；维生素B1 0.2 mg/L；维生素B6 0.2 mg/L；烟酸 0.5 mg/L；甘氨酸 2.0 mg/L；肌醇 100 mg/L；步骤（3）中所述的继代培养基的原料组分和质量含量为∶改良MS + 6‑BA 4.5~6.5 mg/L + IBA 0.5~1.0 mg/L +IAA 0.5~1.0mg/L + 蔗糖30000 mg/L + 琼脂3500 mg/L；所述的改良MS培养基的组成为：KNO3 1600 mg/L；NH4NO3 1500 mg/L；CaCl2·2H2O 220 mg/L；MgSO4·7H2O 370 mg/L；KH2PO3 100 mg/L；Ca(NO3)2 450 mg/L；MnSO4·4 H2O 25 mg/L；ZnSO4·7 H2O 10 mg/L；CuSO4·5 H2O 0.025 mg/L；H3BO3 6.2 mg/L；Na2MoO4·2 H2O 0.025 mg/L；维生素B1 0.2 mg/L；维生素B6 0.2 mg/L；烟酸 0.5 mg/L；甘氨酸 2.0 mg/L；肌醇 100 mg/L；步骤（4）所述的育苗基质是泥炭和珍珠岩按体积比为1∶1混合，并在其混合物中加入质量分数为0.5%的辛硫酸颗粒剂和质量分数为0.5%硫酸亚铁，混匀；步骤（6）所述的激素溶液为200～400 mg/L ABT 6#溶液。