[发明专利]一种体外酶反应生产L(+)-乙偶姻的方法有效
| 申请号： | 201710215961.8 | 申请日： | 2017-04-03 |
| 公开（公告）号： | CN106967741B | 公开（公告）日： | 2020-02-21 |
| 发明（设计）人： | 王智文;崔真真;毛雨丰;马红武;赵玉姣;陈涛 | 申请（专利权）人： | 天津大学 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N1/21;C12N9/02;C12N9/04;C12P7/26;C12R1/19 |
| 代理公司： | 天津市北洋有限责任专利代理事务所 12201 | 代理人： | 陆艺 |
| 地址： | 300072*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： |
本发明公开了一种体外酶反应生产L(+)‑乙偶姻的方法，步骤为：(1)将载体pET28a与2,3‑丁二醇脱氢酶编码基因bdhA连接得到pET28a‑bdhA并导入大肠杆菌，发酵，纯化，浓缩，得到2,3‑丁二醇脱氢酶浓缩液；将载体pET28a与NADH氧化酶编码基因yodC连接得到pET28a‑yodC并导入大肠杆菌，发酵，纯化，浓缩，得到NADH氧化酶浓缩液；(2)将2,3‑丁二醇脱氢酶浓缩液、NADH氧化酶浓缩液、meso‑2,3丁二醇、NAD |
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| 搜索关键词： | 一种 体外 反应 生产 乙偶姻 方法 | ||
【主权项】：
一种体外酶反应生产L(+)‑乙偶姻的方法，其特征是包括如下步骤：(1)将蛋白质表达载体pET28a与2,3‑丁二醇脱氢酶编码基因bdhA连接得到质粒pET28a‑bdhA，将所述质粒pET28a‑bdhA导入大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)中得到菌株BL21‑1，对菌株BL21‑1培养发酵表达2,3‑丁二醇脱氢酶，纯化，浓缩，得到2,3‑丁二醇脱氢酶浓缩液；将蛋白质表达载体pET28a与NADH氧化酶编码基因yodC连接得到质粒pET28a‑yodC，将所述质粒pET28a‑yodC导入大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)中得到菌株BL21‑2，对菌株BL21‑2培养发酵表达NADH氧化酶，纯化，浓缩，得到NADH氧化酶浓缩液；(2)将2,3‑丁二醇脱氢酶浓缩液、NADH氧化酶浓缩液、meso‑2,3‑丁二醇、NAD+和FAD+混合均匀，反应，得到L(+)‑乙偶姻。
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