[发明专利]一种具有生物活性的COX52‑69多肽的固相合成方法及其用途

摘要

本发明提供了一种具有生物活性的COX52‑69多肽的固相合成方法，该多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述固相合成方法包括以下步骤按照多肽的顺序重复添加肽链上的下一氨基酸，直至整条肽链18个氨基酸全部添加完成并检测通过；加入切割液，在通风橱中室温搅拌裂解，制得多肽粗品；利用高效液相色谱检测合成的多肽粗品，并分析合成产物中多肽的纯度；用质谱检测多肽粗品的分子量，确定合成的多肽是否是目标产物。本发明利用化学合成的多肽在动物体内体外实验，均发现化学合成的多肽有抑制葡萄糖引起的胰岛素分泌的功能和减轻体重的作用，能够用于制备抵抗高胰岛素血症和减轻体重的药物中，其具有生物活性。

主权项

一种具有生物活性的COX52‑69多肽的固相合成方法，该多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示：LLPAGWVLSH LDSYKKRE，其特征在于所述固相合成方法包括以下步骤：(1)、缩合反应：使用DMF预溶胀树脂，滤去溶剂备用；向反应柱中加入脱保护试剂，反应后脱去树脂上的的FMoc保护基团，抽干，继续采用DMF清洗后抽干，并检测；称取第一个Fmoc‑氨基酸Fmoc‑GLu(tBu)‑OH，同时称取HOBt备用，将二者同时加入反应柱中，并且溶于DCM中，然后加入DIC并搅拌；称取DMAP投入反应柱中；氨基酸与反应试剂一同反应，反应完毕后抽干并用DMF清洗；向反应柱中加入脱保护试剂，反应后，脱去树脂上的的FMoc保护基团，抽干，继续采用DMF清洗后抽干，并检测；接下来的按照COX52‑69多肽的顺序重复添加肽链上的下一氨基酸，直至整条肽链18个氨基酸全部添加完成并检测通过；全部完成后，使用无水甲醇清洗并使用抽滤瓶将其抽干；(2)、肽链的切割：在抽干的合成肽树脂中加入切割液，在通风橱中室温搅拌裂解，使用砂芯漏斗过滤除去树脂，收集滤液，滤液经乙醚萃取后放置于干燥瓶内进行干燥，直至其成为白色粉末，即制得多肽粗品；(3)、粗肽的检测和纯化：利用高效液相色谱检测合成的多肽粗品，并分析合成产物中多肽的纯度；(4)、肽的质谱鉴定：用质谱检测多肽粗品的分子量，确定合成的多肽是否是目标产物，最后将收集的样品用三氟乙酸和水溶解制成溶液倒入样品杯中，冷冻过夜，次日用真空干燥剂冷冻干燥，最后获得的白色粉末状物质即为纯品COX52‑69多肽。