[发明专利]一种烟草及烟草制品中烟碱的手性分析高效液相色谱法

摘要

本发明公开了一种烟草及烟草制品中烟碱的手性分析高效液相色谱法，其特征在于将烟草及烟草制品样品干燥、粉碎和过筛，样品经过氢氧化钠溶液浸润后，采用甲基叔丁基醚和甲醇溶液萃取，萃取液经基质分散固相萃取净化后，使用手性柱‑正相液相色谱紫外检测器分析，采用峰面积归一化法定量检测烟草及烟草制品中S‑(‑)‑烟碱和R‑(+)‑烟碱的比例。本方法提供的检测方法，样品萃取净化方法简单高效，可降低样品液对色谱柱的污染，液相检测方法灵敏度高，分析时间短，能够满足大批量烟草及烟草制品样品中烟碱的手性分析。

主权项

一种烟草及烟草制品中烟碱的手性分析高效液相色谱法，其特征在于：将烟草及烟草制品样品干燥、粉碎和过筛，样品经过氢氧化钠溶液浸润后，采用甲基叔丁基醚和甲醇溶液萃取，萃取液经基质分散固相萃取净化后，使用手性柱‑正相液相色谱紫外检测器分析，采用峰面积归一化法定量检测烟草及烟草制品中S‑(‑)‑烟碱和R‑(+)‑烟碱的比例，具体步骤如下：1). 标准溶液的配制：称取约100.0 mg的S‑(‑)‑烟碱标准品，用正己烷和甲醇溶液稀释定容到50 mL棕色容量瓶中，配制成浓度约为2.0 mg/mL的S‑(‑)‑烟碱标准储备液；称取约50.0 mg的R‑(+)‑烟碱标准品，用正己烷和甲醇溶液稀释定容到50 mL棕色容量瓶中，配制成浓度约为1.0 mg/mL的R‑(+)‑烟碱标准储备液；利用S‑(‑)‑烟碱标准储备液和R‑(+)‑烟碱标准储备液稀释，配制S‑(‑)‑烟碱和R‑(+)‑烟碱浓度分别为100 μg/mL和5 μg/mL的混合标准溶液，另外分别稀释得到100 μg/mL的S‑(‑)‑烟碱和R‑(+)‑烟碱标准溶液；2). 烟草及烟草制品样品的混匀：将烟草及烟草制品样品置于40 oC烘箱中，1小时后将烟草及烟草制品取出，粉碎后过0.45毫米孔径标准筛；3). 烟草及烟草制品样品的萃取：称取0.3 g已粉碎的样品于15mL具塞离心管中，加入2.0 mL 5% 的氢氧化钠溶液，涡旋1min混匀后静置10 min浸润样品，取10 mL甲基叔丁基醚/甲醇溶液到离心管中，并于旋涡混合器上以4000 rpm速度振荡30 min；4). 萃取液的净化：取1.5 mL萃取后上清液于2 mL内含有基质分散固相萃取材料的净化离心管中，于旋涡混合器上以4000 rpm振荡2 min，以10000 rpm离心1 min，取上清液过0.45 μm有机相滤膜后进液相分析；5).正相高效液相色谱条件：分析柱为Chiralcel OD‑H液相色谱柱，柱长 250 mm ，内径4.6 mm ，固定相粒径5 µm；流动相为正己烷和甲醇溶液，流速1 mL/min；等度洗脱；柱温30 ℃；进样体积 10 μL；紫外检测器检测波长252 nm；分析时间15 min；采用对照标样与样品中烟碱色谱峰的保留时间进行S‑(‑)‑烟碱和R‑(+)‑烟碱的定性分析，对峰面积进行归一化定量S‑(‑)‑烟碱和R‑(+)‑烟碱占总烟碱的比例。