[发明专利]基因沉默指示基因及其病毒诱导沉默载体以及构建和侵染方法有效
| 申请号： | 201710124534.9 | 申请日： | 2017-03-03 |
| 公开（公告）号： | CN106939313B | 公开（公告）日： | 2020-01-10 |
| 发明（设计）人： | 王福生;赵晓春;申晚霞;刘小丰;朱世平 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院柑桔研究所 |
| 主分类号： | C12N15/29 | 分类号： | C12N15/29;C12N15/11;C12N15/83;C12N15/66;A01H5/00;C12Q1/6895 |
| 代理公司： | 50211 重庆市前沿专利事务所(普通合伙) | 代理人： | 邹晓艳 |
| 地址： | 400712 重*** | 国省代码： | 重庆;50 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种用于TRV介导的基因沉默系统中的指示基因，其核酸序列如SEQ ID No:1所示，还公开了含有该序列的病毒诱导沉默载体及其构建方法，并利用该沉默载体侵染柑橘幼苗的方法。本发明为TRV介导的病毒诱导基因沉默体系提供有效的指示基因，是首次在柑橘中成功建立TRV介导的病毒沉默系统，成功地沉默了柑橘中的指示基因。利用本发明的沉默载体构建的沉默系统操作简单、转化效率高、能够快速地在柑橘中对基因进行功能验证。能够有效地抑制柑橘中的内源基因表达，表型显著。本发明提供的沉默载体为快速、有效地在柑橘中进行基因功能验证提供了可靠技术。 | ||
| 搜索关键词： | 基因 沉默 指示 及其 病毒 诱导 载体 以及 构建 侵染 方法 | ||
【主权项】：
1.一种含有柑橘CHlI指示基因的病毒诱导沉默载体的构建方法，其特征在于，所述载体为TRV介导的柑橘CHlI基因病毒诱导沉默载体，其含有如SEQ ID No:1所示的核苷酸序列,构建方法包括如下步骤：/n(1)提取柑橘植株cDNA；/n(2)以柑橘植株cDNA为模板，以引物CiCHlI-V2-F和CiCHlI-V2-R进行PCR扩增，引物序列为：/nCiCHlI-V2-F：5’-TCTAGAGGTCTGTGGGACGATTGACAT-3’，/nCiCHlI-V2-R：5’-GAGCTCCGAGCTCTCTCCTCCACAATC-3’；/n(3)将步骤(2)的扩增产物进行回收纯化得到目的基因片段；/n(4)用XbaI和SacI限制性内切酶分别对TRV2载体和步骤(3)得到的目的基因片段进行双酶切；/n(5)将步骤(4)得到的目的基因片段和TRV2载体的酶切产物进行连接；/n(6)将连接产物转化至DH5α感受态细胞，筛选得到阳性克隆，提取质粒，即得。/n
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