[发明专利]基于核酸适配体检测miRNA-155的方法

摘要

本发明提供了一种基于核酸适配体检测miRNA‑155的方法，本发明是基于核酸适配体与目标物的特异性识别，利用phi29 DNA聚合酶在滚环扩增中的链延伸作用以及核酸内切酶在特异性位点对核酸链的切割作用以及分子信标的荧光基团能够产生荧光信号的特性构建了该生物检测方法。该检测方法具有检测速度快，检测限低，特异性高等优点，可以弥补miRNA‑155现有检测方法的缺陷与不足，实现对其快速，准确的定量检测。

主权项

一种基于核酸适配体检测miR‑155的方法，其特征在于，包括如下步骤：1) 将1μL， 1.0μM 的Hairpin1，1μL，1.0μM 的Circular template 1, 1μL，1.0μM 的Hairpin2， 1μL，1.0μM的 Circular template 2，1μL，1.0μM Molecular beacon，1μL，10×的phi29 DNA聚合酶，1μL，10×的Nb.BbvCI ，5μL，10× NEB buffer和待测物加入到EP管中，震荡30s，放入37℃的水浴锅中反应70min；2）将反应好的溶液从水浴锅中取出，放入85℃的水浴锅中水浴加热10min，使体系中的酶失活；3）10 min后，从水浴锅中取出混合溶液，然后用安捷伦荧光检测仪测定混合溶液的荧光强度，据此检测目标物，Circular template 1的碱基序列如SEQ ID NO:1所示；Circular template 2的碱基序列如SEQ ID NO:2所示；Hairpin1的碱基序列如SEQ ID NO:3所示；Hairpin2的碱基序列如SEQ ID NO:4所示；Molecular beacon的碱基序列如SEQ ID NO:5所示。