[发明专利]一种基于银负载硫化铜纳米线的夹心型免疫传感器的制备方法及应用

摘要

本发明属于新型功能材料与生物传感检测技术领域，提供了一种基于银负载硫化铜纳米线的夹心型免疫传感器的制备方法及应用；具体是采用银负载的硫化铜纳米线作为检测抗体标记物，实现了肺癌癌标志物CA125、CA153、SCCA的检测，具有特异性强，灵敏度高，检测限低，对肺癌的早期检测具有重要的科学意义和应用价值。

主权项

1.一种基于银负载硫化铜纳米线的夹心型免疫传感器的制备方法，其特征在于，步骤如下：（1）将直径为4mm的玻碳电极用Al2O3抛光粉打磨，超纯水清洗干净；（2）取6 µL、1.0 ~ 3.0 mg/mL的L‑cys@Ag滴涂到电极表面，室温下晾干，用超纯水冲洗电极表面，晾干；（3）继续将6 µL、10 ~ 15 µg/mL的肿瘤标志物捕获抗体滴加到电极表面，超纯水冲洗，4°C冰箱中干燥；（4）继续将3 µL、2.0~ 3.0 mg/mL的牛血清白蛋白BSA溶液滴加到电极表面，超纯水冲洗电极表面，4°C冰箱中晾干；（5）滴加6 µL、0.1pg ~ 30 ng/mL的一系列不同浓度的肿瘤标志物抗原溶液，超纯水冲洗电极表面，4°C冰箱中干燥；（6）将6 µL、1 ~ 3 mg/mL的银负载硫化铜纳米线检测抗体孵化物溶液，滴涂于电极表面上，置于4°C冰箱中晾干，制得一种基于银负载硫化铜纳米线的夹心型免疫传感器；所述L‑cys@Ag 的制备，步骤如下：取25 mL，2 mmoL.L‑1的L‑半胱氨酸L‑cys于烧杯中，边搅拌边依次加入1 ~ 3 mL质量分数为1%的聚乙烯吡咯烷酮PVP，1 ~ 3 mL、0.1 moL.L‑1的抗坏血酸和2 ~ 4 mL、0.1 moL.L‑1的AgNO3溶液，室温下磁力搅拌10 min；离心分离，超纯水洗涤三次，65°C真空干燥6 ~10h，制得L‑cys@Ag。所述银负载硫化铜纳米线检测抗体孵化物溶液的制备，步骤如下：（1）硫化铜纳米线的合成称取1 ~ 3 mmol CuCl2溶解于50 ml水中，边搅拌边依次加入1 ~ 3 mmol的十六烷基胺和0.2 g葡萄糖，溶解后转移到100 mL高压反应釜中60°C反应4 ~ 5 h，升温到120°C反应3 ~ 4 h，离心分离；将分离得到的固体分散到50 mL 、0.2 moL.L‑1 的Na2S溶液中，加入6 ~ 10 mg PVP，继续搅拌30 min后转移到高压反应釜中，在120°C下反应2 ~ 3 h，冷却到室温，在12000 rpm离心10min，超纯水洗涤三次，50°C真空干燥箱中干燥12 ~ 14 h，制得硫化铜纳米线；（2）银负载硫化铜纳米线的合成将0.1 ~ 0.3 g硫化铜纳米线分散于100 mL超纯水中，搅拌条件下加入10 mL、0.1 moL.L‑1的AgNO3溶液和1.5 mL、质量分数为1%的PVP溶液，搅拌10 min后，加入10 mL，0.1 moL.L‑1的抗坏血酸，搅拌30 min，离心分离，超纯水洗涤三次，60°C真空干燥箱中干燥12 ~ 14 h，制得银负载硫化铜纳米线；（3）银负载硫化铜纳米线检测抗体孵化物溶液的制备将2~ 4 mg的银负载硫化铜纳米线溶于1 mL的pH 7.4的磷酸盐缓冲溶液中，震荡溶解，再加入100 μL、80 ~ 120 μg/mL的肿瘤标志物检测抗体溶液和900 μL、50 mmol/L的pH 7.4的磷酸盐缓冲溶液，4°C恒温振荡培养箱中振荡，孵化12 h，制得银负载硫化铜纳米线检测抗体孵化物溶液，4°C下保存备用。