[发明专利]CRISPR/Cas9靶向敲除人Lin28A基因及其特异性gRNA

摘要

本发明属于分子生物学与生物医学技术领域。具体的说，本发明涉及基于CRISPR/Cas9系统的gRNA序列在敲除人Lin28A基因的应用以及肿瘤治疗中的应用。本发明根据CRISPR/Cas9的设计原则，设计了6个向导RNA（gRNA），其序列表见SEQ ID NO.1‑6所示，并且将其构建在PX458载体上，经活性检测筛选获得2个高效靶向gRNA。在人肝癌细胞株(HepG2)和人黑色素瘤细胞株（A375）中利用这2个gRNA指导的CRISPR/Cas9系统，可以有效的敲除人Lin28A基因，这一系统易于操作，人Lin28A基因敲除效率高，适用于多种肿瘤细胞模型。本发明涉及的gRNA有望在治疗肿瘤的新型药物中得到应用。

主权项

在CRISPR/Cas9特异性敲除人Lin28A基因中用于靶向人Lin28A基因的 gRNA，所述 gRNA 在人Lin28A基因上的靶序列符合5’‑ N (20)‑NGG3’ 或 者5’‑CCN‑ N (20)‑3’的序列排列规则，在人Lin28A基因上的靶序列是唯一的，其特征在于：所述gRNA在人Lin28A基因的靶向位点位于人Lin28A基因的外显子上。