[发明专利]一种用于检测胶类中药及其复方制剂中驴皮源成分含量的组合物、试剂盒及其检测方法

摘要

本发明公开了一种用于检测胶类中药及其复方制剂中驴皮源成分含量的组合物、试剂盒及其检测方法，所述组合物由多肽I、多肽II、多肽III以及对照品检测基质组成。所述多肽I的氨基酸序列为SEQ ID NO.1所示，多肽II的氨基酸序列为SEQ ID NO.2所示，多肽III的氨基酸序列为SEQ ID NO.3所示，对照品检测基质为鱼皮胶。通过多肽I的检测值减去多肽II的检测值，并利用多肽III的检测值来修正检测偏差，从而实现对胶类中药及其复方制剂中驴皮源成分的含量检测。该方法具有含量检测准确、操作简单的优点，在胶类中药及其复方制剂产品质量监控领域将具有广泛的应用前景。

主权项

1.一种用于检测胶类中药及其复方制剂中驴皮源成分含量的方法，其特征在于，包括如下步骤：/n(1)对照品溶液的制备/n1)基质溶液的制备：将称量好的对照品检测基质置于量瓶中，加入NH₄HCO₃溶液，超声使样品完全溶解，加NH₄HCO₃溶液稀释至刻度；所述对照品检测基质为鱼皮胶；/n2)对照品母液的制备：将称量好的对照品检测基质置于量瓶中，加入NH₄HCO₃溶液，超声使样品完全溶解，将称量好的的多肽I、多肽II和多肽III加入该量瓶中，用NH₄HCO₃溶液溶解并稀释至刻度；/n所述多肽I的氨基酸序列为Gly-Ala-Thr-Gly-Pro-Ala-Gly-Val-Arg，多肽II的氨基酸序列为/nGly-Glu-Pro-Gly-Pro-Ala-Gly-Leu-Pro-Gly-Pro-Hyp-Gly-Glu-Arg，多肽III的氨基酸序列为Gly-Val-Val-Gly-Pro-Gln-Gly-Ala-Arg；/n3)对照品溶液制备：以步骤1)制得的基质溶液为溶剂，将步骤2)制得的对照品母液稀释，微孔滤膜过滤，续滤液中加胰蛋白酶溶液，酶解；/n(2)待检测样品溶液的制备/n取待测样品，重量记为N₁，加入三氯乙酸溶液，超声、静置、离心后去除上清液，沉淀用丙酮洗涤、干燥后称重，重量记为N₂，称取沉淀于量瓶中，加入NH₄HCO₃溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，微孔滤膜过滤，续滤液中加入胰蛋白酶溶液，酶解；/n(3)液质联用仪检测/n分别取对照品溶液、待检测样品溶液放入液质联用仪进行检测，选择m/z393.4→499.3、643.3，m/z702.8→725.4、838.4，m/z421.0→684.4、528.3作为检测离子对进行MRM扫描，其中选择m/z393.4→499.3、m/z702.8→725.4、m/z421.0→684.4分别作为多肽I、多肽II和多肽III的定量离子对进行定量检测；/n(4)样品中驴皮源成分含量的计算/n以对照品溶液的各多肽的含量为纵坐标、峰面积为横坐标进行标准曲线的绘制，由此计算出样品中多肽I、多肽II和多肽III的含量，待检测样品中多肽I的含量记为M₁、多肽II的含量记为M₂、多肽III的含量记为M₃，然后，按下式计算出各样品中驴皮源成分的含量：/n驴皮源成分的含量(％)＝(M1/392.4–M2/1403.5)×525/M3×N₂/N₁×100％。/n