[发明专利]一种利用青海弧菌Q67测试采油废水生物毒性的方法

摘要

本发明公开了一种利用青海弧菌Q67测试采油废水生物毒性的方法。以采油废水为测试废水，以青海弧菌Q67为指示生物，以96孔微孔板为载体；通过96孔微孔板分析方法，采用微孔板分光光度计来检测其发光强度；利用实验组与对照组的发光强度来计算发光抑制率，设定Zn（NO₃）₂作为毒性参照物，从而判断采油废水的生物毒性。本发明方法利用微板法对采油废水的毒性进行检测分析，通过计算发光菌的发光抑制率，从而判断采油废水的综合毒性大小，解决了常规理化指标不能表示采油废水生物毒性的问题，快速、灵敏、便于推广应用，并且所选用的毒性参照物Zn（NO₃）₂实验结果稳定，价格便宜，毒性中等。

主权项

1.一种利用青海弧菌Q67测试采油废水生物毒性的方法，其特征在于具体步骤为：(1)将采回的浑浊采油废水用0.45μm滤膜过滤，制得处理后的采油废水，然后将其置于4℃的冰箱中保存待用，假设处理后的采油废水的浓度为单位1；(2)培养青海弧菌Q67使其达到对数生长期，得到青海弧菌Q67菌液，将其作为工作菌液；(3)将工作菌液加入到预先设置好采油废水浓度梯度的白色不透明96孔微孔板中，制作采油废水和工作菌液的反应体系，每孔总体积为200μL，实验孔每孔含100μL工作菌液和100μL不同浓度的采油废水，空白对照孔每孔含100μL工作菌液和100μL超纯水，使工作菌液与采油废水充分反应15min，然后用Synergy H2微孔板分光光度计测定其发光强度RLU，相同条件下，每个采油废水浓度进行9次重复实验，并取平均值；(4)设定Zn(NO3)2作为毒性参照物，用超纯水将Zn(NO3)2稀释不同浓度梯度，然后加入工作菌液充分反应15min，采用Synergy H2微孔板分光光度计测定其发光强度，计算发光抑制率并用Origin9.0中的Logistic函数对发光抑制率与Zn(NO3)2浓度进行拟合，建立浓度‑效应曲线；(5)采用Synergy H2微孔板分光光度计检测微孔板发光强度，利用实验组与对照组的发光强度计算出不同浓度采油废水对青海弧菌Q67的发光抑制率E，以采油废水不同浓度为横坐标，以不同浓度对应的发光抑制率为纵坐标，利用Origin9.0中的Logistic函数对不同浓度采油废水与发光抑制率E进行非线性拟合；式中：I0为空白对照样的RLU平均值，I为各浓度9次平行样的RLU平均值；对照相同发光抑制率下Zn(NO3)2的浓度，根据毒性参照物Zn(NO3)2判断采油废水的综合毒性大小，具体如下：Zn(NO3)2的浓度C＜0.29mg/L时，毒性级别为微毒或无毒；Zn(NO3)2的浓度0.29mg/L≤C＜1.11mg/L时，毒性级别为低毒；Zn(NO3)2的浓度1.11mg/L≤C＜1.60mg/L时，毒性级别为中毒；Zn(NO3)2的浓度1.60mg/L≤C＜2.91mg/L时，毒性级别为高毒；Zn(NO3)2的浓度C≥2.91mg/L时，毒性级别为剧毒。