[发明专利]用于检测雌激素化合物的重组酵母及其构建方法

摘要

本发明公开了用于检测雌激素化合物的重组酵母及其构建方法。本发明提供的一种重组菌，为在酿酒酵母中表达雌激素受体β基因、抗性筛选基因表达盒、3个串联ERE基因和报告基因表达盒，得到的重组菌。利用本发明方法所构建的重组酵母在雌激素类化合物存在时，可稳定高效合成GFP，GFP的表达量与雌激素类化合物的浓度呈正比，17β雌二醇的EC50为3.25pM，比现有文献报道提高约20倍。本发明为快速、灵敏地检测环境中雌激素类化合物奠定基础。

主权项

1.一种重组菌，为在酵母中表达雌激素受体β基因和含有3个串联ERE基因的报告基因表达盒，得到的重组菌；所述含有3个串联ERE基因的报告基因表达盒依次包括所述3个串联ERE基因、驱动报告基因表达的启动子和所述报告基因；所述驱动报告基因表达的启动子为部分ADH1；所述部分ADH1的核苷酸序列为序列4第1860‑2269位；所述重组菌中还表达抗性基因表达盒；所述3个串联ERE基因的核苷酸为序列表中序列4第1815‑1853位；所述在酵母中表达雌激素受体β基因为将所述雌激素受体β基因以重组载体的方式导入所述酵母中进行表达；所述在酵母中表达雌激素受体β基因、抗性筛选基因表达盒和含有3个串联ERE基因的报告基因表达盒为将同源重组片段整合到所述酵母基因组中进行表达；所述同源重组片段包括所述抗性筛选基因表达盒和所述含有3个串联ERE基因的报告基因表达盒的片段；所述重组载体为将所述雌激素受体β基因插入表达载体中，且表达所述雌激素受体β基因的载体；所述重组载体中，驱动所述雌激素受体β基因表达的启动子为序列表中序列2所示的DNA分子；所述雌激素受体β基因的核苷酸序列为序列1第7‑1599位；所述抗性筛选基因表达盒的抗性筛选基因为卡那霉素抗性基因；所述抗性筛选基因表达盒的核苷酸序列为序列4第540‑1853位；所述含有3个串联ERE基因的报告基因表达盒的报告基因为GFP基因，所述含有3个串联ERE基因的报告基因表达盒的核苷酸序列为序列4第1815‑3242位；所述表达载体为p426 GDP载体；所述同源重组片段的核苷酸序列为序列4第33‑3748位；所述同源重组片段通过整合质粒介导的同源重组整合；所述整合质粒的核苷酸序列为序列4；所述酵母为酿酒酵母。