[发明专利]一种呋喃西林生物标识物5-硝基-2-糠醛的内标检测方法

摘要

本发明公开了一种呋喃西林生物标识物5‑硝基‑2‑糠醛的内标检测方法，以5‑硝基‑2‑糠醛(NF)为检测对象，采用2,4‑二硝基苯肼为衍生化试剂将目标物转化为稳定、检测器下响应灵敏的化合物，突破现有研究无法克服内源性等非呋喃西林源生物标示物产生的局限性。

主权项

1.一种呋喃西林生物标识物5‑硝基‑2‑糠醛的内标检测方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）试剂配制将100毫克2,4‑二硝基苯肼DNPH 溶解在1毫升浓盐酸中，然后用甲醇定容至100毫升的容量瓶里，制得浓度为1.0mg/mL的衍生化试剂溶液；（2）衍生化及净化称取1.0±0.1 g的样品，放入50毫升的样品管内，加入10毫升盐酸、100μL衍生化试剂溶液、100μL 内标物溶液，充分涡旋后，避光放置于60℃的水浴中衍生反应20分钟，随后6000 转/min离心五分钟，取上清液经Oasis PRiME HLB 固相萃取小柱净化后，得到的液体旋蒸至干后，残留物用1.0 毫升的流动相复溶，超声溶解后用0.2μm的滤膜过滤，得待检测液；（3）UPLC‑MS分析 待检测液经液相色谱串联质谱仪检测分析，内标法定量；步骤（2）中所述内标物溶液为对二甲氨基苯甲醛PDAB 溶液，内标物溶液浓度为1.0μg/ mL；步骤（2）中所述盐酸浓度为0.2 mol/L；步骤（3）中，制标准曲线5‑硝基‑2‑糠醛标准工作溶液的浓度设置为0.5ng/mL、1.0 ng/mL、2.0 ng/mL、5.0 ng/mL、10.0 ng/mL，5‑硝基‑2‑糠醛标准工作溶液中PDAB 浓度恒定为100 ng/mL；步骤（3）中色谱条件为：色谱柱：Waters ACQUITY CSHTM C18 柱，规格：100*2.1 mm，1.7μm；进样量：10 μL; 流速：0.2 mL/min；柱温为45℃；流动相设置为：A相超纯水，30%体积；B相为乙腈，70%体积；洗脱程序设置为等度洗脱：A保持30%不变，B 保持70%不变。