[发明专利]一种快速创制加工型辣椒雄性不育育性恢复新种质的方法

摘要

本发明公开了一种快速创制加工型辣椒雄性不育育性恢复新种质的方法，包括加工型辣椒供体亲本植株在26.4±0.4℃温度条件下；花药培养选择处于单核靠边期的小孢子用于诱导胚状体发生；每天上午9点前取花蕾，置于4℃冰箱中低温预处理1‑3d；于无菌条件下，酒精浸泡，然后消毒，无菌水冲洗，用镊子将花药从花蕾中取出接种到诱导培养基上；培养皿接种8个花蕾；在无菌条件下从花蕾中取出花药后均匀分散于诱导培养基上；将诱导出的胚状体转到MS培养基上，当根长达4‑5cm时进行移栽，移栽前需进行炼苗。本发明便于更有效地展开花药培养工作，掌握取材花蕾形态指标，减少操作环节，保证花药培养诱导效率。

主权项

一种加工型辣椒花药的培养方法，其特征在于，所述加工型辣椒花药的培养方法包括以下步骤：步骤一，辣椒植株在26.4±0.4℃温度条件下，进行辣椒花药培养；步骤二，辣椒单倍体培养选择处于单核靠边期的小孢子用于诱导胚状体发生；步骤三，花蕾在4℃冰箱中低温预处理1‑3d；之后在无菌条件下将供试花蕾在70％酒精中浸泡30s后再0.1％升汞中浸泡7min，用无菌水冲洗3‑4次，接种到MS+BA 0.5mg/L+2,4‑D 0.5mg/L+3％蔗糖+琼脂7g/L+AgNO3 4mg/L+活性炭0.4％的培养基上，pH5.8；接种密度为直径100mm培养皿接种8个花蕾；步骤四，将接种好花药的培养皿置于35℃恒温培养箱中处理7d；然后在白天温度28℃，夜晚温度为20℃的组培室中继续培养；步骤五，选择根尖生长旺盛的植株，从每株取小于2cm的根5‑6条，蒸馏水漂洗后，饱和对二氯苯溶液中处理3.5h，卡诺氏固定液固定2h，蒸馏水冲洗3‑4次，0.2M盐酸处理5min，蒸馏水冲洗3‑4次，45％冰乙酸溶液处理5min，卡宝染色20min，制片，显微镜下观察，寻找处于细胞分裂中期，染色体分散的细胞，计数；步骤六，胚状体在培养基中成苗至4‑5cm高时，需要进行移栽，移栽前需对花培植株试管苗进行炼苗。