[发明专利]一种无需转管的DNA提取方法

摘要

本发明属于核酸提取纯化技术领域，具体涉及一种无需转管的DNA提取方法；包括如下步骤：1）试剂准备：配制裂解液、漂洗液、洗脱液，准备好组合管；2）DNA提取：样品放入组合管内层裂解管中，加入裂解液和蛋白酶K后裂解，离心，内层裂解管中的液体在穿过中层DNA吸附管内的核酸吸附膜时，被核酸吸附膜结合，分离并获得纯化的DNA；3）PCR扩增及电泳；本发明提取DNA无需转管，简化了DNA提取操作步骤，缩短了检测时间；避免了转管操作过程中可能带来的DNA损失和交叉污染的风险。

主权项

1.一种无需转管的DNA提取方法，其特征在于，包含如下步骤：1）试剂准备配制裂解液、漂洗液、洗脱液，准备好组合管；所述裂解液，其组成成分包括表面活性剂、离液盐、pH缓冲剂；所述表面活性剂为十二烷基硫酸钠、十二烷基磺酸钠、月桂酰基肌氨酸钠、聚乙二醇辛基苯基醚、TWEEN 20、TWEEN 40、TWEEN 60、TWEEN 80、NP 40、十六烷基三甲基溴化铵中的一种或两种及以上的混合，所述表面活性剂的浓度为0.1% m/v ‑10%m/v；所述离液盐为异硫氰酸胍、盐酸胍、硫氰酸钾、高氯酸钠、碘化钾、碘化钠中的一种或两种及以上的混合，所述离液盐的浓度为3‑5 mol/l；所述pH缓冲剂为Tris‑HCl、Tris‑醋酸、NaH2PO4‑Na2HPO4、KH2PO4‑K2HPO4、醋酸‑醋酸钠、柠檬酸‑柠檬酸钠，所述pH缓冲剂的pH值为4.5‑9.0；所述漂洗液为80%乙醇；所述洗脱液其组分为：10 mmol/l Tris‑HCl，0.1 mmol/l EDTA‑2Na，pH 8.0；所述组合管，包含三层套管的结构，所述三层套管的结构，包含内层裂解管（1）、中层DNA吸附管（2）、外层收集管（3）和盖子（9）；所述裂解管（1）为中空结构，顶部为裂解管管口（8），底部有收口，收口台阶上有疏水性过滤材料（5）；所述吸附管（2）为中空结构，顶部为吸附管管口（7），底部有收口，收口台阶上设有两层材料，上层为核酸吸附膜（4），下层为疏水性过滤材料（5）；所述收集管（3）顶部有收集管管口（6）；所述盖子（9）可分别盖在裂解管管口（8）、吸附管管口（7）、收集管管口（6）上；盖子（9）边缘有柔性长柄和收集管管口（6）边缘连接；2）DNA提取DNA提取样品放入组合管内层裂解管中，加入裂解液和蛋白酶K后50℃‑100℃裂解，离心，内层裂解管（1）中的液体在穿过中层DNA吸附管（2）内的核酸吸附膜（4）时，被核酸吸附膜（4）结合，分离并获得纯化的DNA；具体包括以下步骤：a.将样品放入组合管裂解管（1）中，加入400‑500 μl裂解液，15‑25 μl蛋白酶K，涡旋振荡混匀，50℃‑100℃加热10‑20分钟；b.12000 rpm离心1‑2分钟，丢弃裂解管（1），倒弃收集管（3）中的液体，吸附管（2）放回收集管（3），向吸附管（2）内加入400‑500 μl漂洗液，12000 rpm离心0.5‑1.0分钟；c.倒弃收集管（3）的液体，吸附管（2）放回收集管（3）内，向吸附管（2）内加入400 ‑500μl漂洗液，12000 rpm离心0.5‑1.0分钟；d.丢弃收集管（3），吸附管（2）放入一根新的收集管（3），打开盖子，70℃加热3‑4分钟；e.向吸附管（2）内加入30 μl洗脱液，盖上盖子，70℃加热3‑4分钟，12000 rpm离心1‑1.5分钟，丢弃吸附管（2），收集管（3）内的液体即DNA溶液；3）PCR扩增及电泳将上步纯化的DNA进行PCR扩增，在电泳仪中检测DNA。