[发明专利]一种实蝇幼虫检疫处理的代谢组学判别方法

摘要

本发明涉及一种实蝇幼虫检疫处理的代谢组学判别方法，包括以下步骤：对检疫性实蝇幼虫样品进行代谢组学前操作，并将得到的实蝇幼虫样品进行代谢组学检测；将检测数据进行数据处理分析，得到样品数据；将样品数据与阴性对照数据和阳性对照数据进行统计学比较，如果所述样品数据与所述阳性对照数据的比较结果为无显著差异，并且与所述阴性对照数据的比较结果为差异显著，则判定所述检疫性实蝇进行了检疫处理。使用该方法可对检疫性实蝇幼虫进行快速、高通量筛查，灵敏度和准确度高，缩短了检疫处理观察期判别的时间，大大降低了检疫处理实验验证的时间和成本。

主权项

1.一种实蝇幼虫检疫处理的代谢组学判别方法，其特征在于，包括以下步骤：/nS1：对待检疫的实蝇幼虫样品进行代谢组学前操作，并将得到的实蝇幼虫样品进行代谢组学检测，包括以下步骤：/nS1.1：提取总代谢物，得到总代谢物提取液，具体步骤为：/n取-80℃储存的10头3龄的实蝇幼虫加入到200μL的提取液中，所述提取液为氯仿、甲醇和水组成，所述提取液中氯仿、甲醇和水的体积比为2:5:2，将所述实蝇幼虫和所述提取液的混合物置入组织破碎仪后得到破碎混合物，所述组织破碎仪的频率为30Hz，所述组织破碎仪运行时间为2min；将所述破碎混合物取出，加入800μL所述提取液，涡漩震荡30s，之后4℃放置20min，得到震荡后混合物；将所述震荡后混合物进行第一次冷冻离心，所述第一次冷冻离心的温度为4℃，所述第一次冷冻离心的力度为16000g，所述第一次冷冻离心时间为15min，经过所述第一次冷冻离心后得到第一上清液和第一残渣，取800μL所述第一上清液转入一只新的EP管中；向所述第一残渣中加入1mL色谱级甲醇，涡漩震荡30s，之后4℃放置20min，再进行第二次冷冻离心，所述第二次冷冻离心的温度为4℃，所述第二次冷冻离心力度为16000g，所述第二次冷冻离心的时间为15min，所述第二次冷冻离心后得到第二上清液和第二残渣，取所述第二上清液1mL，将所述第二上清液与所述第一上清液混合得到上清混合物；/nS1.2：向所述总代谢物提取液中添加内标，具体步骤为：/n取100μL所述上清混合物加入到玻璃衍生小瓶中，再加入20μl 100 ng/μL内标水溶液，混合，氮气吹干；/nS1.3：吹干，加入甲基化试剂进行甲基化，具体步骤为：/n再向所述玻璃衍生小瓶中加入40μL的20 mg/mL盐酸甲氧胺吡啶溶液，37℃下震荡反应90min；/nS1.4：加入烷基化试剂进行烷基化，具体步骤为：/n再向所述玻璃衍生小瓶中加入40μL的BSTFA的衍生试剂，BSTFA含1%TMCS，70℃下反应60min，得到衍生后样本，将所述衍生后样本室温放置30min，得到待检测样本；/nS1.5：进行GC/MS检测，具体步骤为：/n将所述待检测样本进行GC/MS检测，所用毛细管色谱柱为HP-5ms色谱柱，色谱柱长30m，内径为0.25mm，膜厚0.25μm，在所述GC/MS检测过程中：进样口温度为280℃，EI离子源温度230℃，四极杆温度150℃，高纯氦气作为载气，所述高纯氦气的纯度大于99.999%，不分流进样，进样量为1.0μL；升温程序为：初始温度60℃，初始温度维持2min，再以10℃/min的速度升至140℃，然后以4℃/min的速度升至240℃，最后以15℃/min的速度升至300℃，并维持8min；采用全扫描模式进行质谱检测，质谱检测范围为50-600m/z；采用随机顺序进行连续样本分析，避免因仪器信号波动而造成的影响，得到检测数据；/nS2：将S1得到的检测数据进行数据处理分析，得到样品数据；/nS3：将S2得到的样品数据与阴性对照数据和阳性对照数据进行统计学比较，如果所述样品数据与所述阳性对照数据的比较结果为无显著差异，并且与所述阴性对照数据的比较结果为差异显著，则判定所述待检疫的实蝇幼虫进行了检疫处理；否则，判定所述待检疫的实蝇幼虫未进行检疫处理。/n