[发明专利]一种海伦兜兰原球茎的低温保存培养基及低温保存繁殖方法

摘要

本发明公开了一种海伦兜兰原球茎的低温保存培养基及低温保存繁殖方法。它是将无菌播种获得的原球茎转移至低温保存培养基中，在合适的条件下培养，然后将低温保存的原球茎转移至恢复生长培养基中，在合适的条件下，恢复生长分化出小苗，经生根壮苗培养获得完整植株。本发明的方法具有保存成本低、操作简单、植物材料复苏快、生活力高等优点，在需要进行种苗的大规模生产时，能在短期内获得大量的试管苗，对于解决快繁生产急用及种质资源的保存也均具有极其重要的价值。

主权项

1.一种海伦兜兰原球茎低温保存繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)原球茎的获得：选择生长健壮的海伦兜兰母株进行异株人工授粉，将授粉后120～180天的蒴果进行消毒处理，切开果实，将粉末状种子接种到种子萌发培养基上培养，培养温度25～30℃，光照度100～200勒克斯，光照时间12～16小时/天，胚萌发形成原球茎，所述的种子萌发培养基为：每升培养基含有椰子汁50～100毫升、活性炭1.0～2.0克、蔗糖20～30克、琼脂6～7克，其余为1/4MS培养基，pH 5.8～6.0；(2)原球茎离体低温保存：将原球茎转移至低温保存培养基中，培养温度15～20℃，光照度50～100勒克斯，光照时间10～12小时/天，所述的低温保存培养基为：每升培养基含有椰子汁50～100毫升、活性炭2.0～3.0克、蔗糖5‑10克、琼脂7～8克，其余为1/8MS培养基，pH 5.8～6.0；(3)原球茎的恢复生长：将低温保存的原球茎转移至恢复生长培养基中，培养温度25～30℃，光照度100～200勒克斯，光照时间12～16小时/天，原球茎分化出小苗，所述的恢复生长培养基为：每升培养基含有萘乙酸1.0～2.0毫克、椰子汁100～200毫升、蛋白胨1.0～2.0克、活性炭1.0～2.0克、蔗糖20～30克、琼脂6～7克，其余为1/4MS培养基，pH 5.8～6.0；(4)生根壮苗培养：将小苗接种到壮苗培养基中，培养温度25～30℃，光照度1600～2000勒克斯，光照时间12～16小时/天，获得完整植株，所述的壮苗培养基为：每升培养基含有花宝1号1～2克、花宝2号1～2克、MS培养基的维生素和肌醇成分、萘乙酸1.0～2.0毫克、椰子汁100～200毫升、蛋白胨1～2克、香蕉匀浆50～150克、活性炭1.0～2.0克、蔗糖20～30克、琼脂6～7克，余量为水，pH 5.8～6.0。