[发明专利]一种适用于两栖、爬行类物种的骨切片制备方法

摘要

本发明涉及适用于两栖、爬行类物种的骨切片制备方法，该方法包括以下步骤：⑴取样：骨骼样品于中性甲醛溶液中常温下固定后流水冲洗；⑵脱钙：将冲洗好的骨骼样品去除皮肤和肌肉组织，并放入硝酸溶液中脱钙、流水冲洗；⑶在预冷的载物台表面涂布一层合成胶水，冷冻后备用；⑷包埋：将脱钙后的骨骼样品先置于合成胶水中浸泡，然后放到载物台上冷冻的合成胶水表面，冷冻后再次滴加合成胶水冷冻彻底包埋；⑸切片：将所得的包埋好骨骼样品的胶水块切片、贴片、晾干，得到晾干的片子；⑹晾干的片子染色；⑺冲洗蓝化结束后，迅速滴加一滴甘油封片，即得骨切片。本发明操作简便、成本低廉，适合于推广和应用实验教学的脱钙冰冻骨切片实验方法。

主权项

1.一种适用于两栖、爬行类物种的骨切片制备方法，包括以下步骤：⑴取样：取骨骼样品置于中性甲醛溶液中，常温下固定24~48小时后流水冲洗12小时，去除残留固定液；⑵脱钙：将所述步骤⑴冲洗好的骨骼样品去除皮肤和肌肉组织，并放入质量浓度为5%的硝酸溶液中脱钙12~24小时，再流水冲洗12小时去酸，得到脱钙后的骨骼样品；⑶在预冷的载物台表面涂布一层合成胶水，‑20℃冷冻后备用；⑷包埋：将所述脱钙后的骨骼样品置于合成胶水中浸泡5min，得到胶水浸润的骨骼样品；将所述步骤⑶所得的冷冻好的载物台置于体视镜下，用常温镊子粘着去除多余合成胶水的所述胶水浸润的骨骼样品，放到载物台上冷冻的合成胶水表面，因遇冷初步凝固，然后放入‑20℃冰箱进一步冷冻后再次滴加合成胶水冷冻彻底包埋；⑸切片：先将冰冻切片机于‑20℃预冷，然后将所述步骤⑷所得的包埋好骨骼样品的胶水块用刀片修成5mm×5mm的正方形，然后固定到冰冻切片机上匀速切出厚度为12~18μm的连续条带，再用常温载玻片贴片后自然晾干，得到晾干的片子；⑹滴加Ehrlich苏木精染液到所述晾干的片子上，以染液浸没材料为准，染色10~15min后，自来水缓慢冲洗15s；⑺冲洗蓝化结束后，迅速滴加一滴甘油封片，即得骨切片。