[发明专利]一种组织培养条件下耐旱猕猴桃资源的鉴定方法

摘要

本发明提供了一种组织培养条件下耐旱猕猴桃资源的鉴定方法，通过在组织培养条件下，添加不同浓度的聚乙二醇(PEG8000)至培养基中，模拟干旱环境，胁迫处理30天后根据旱害指数鉴定猕猴桃资源的耐旱性，涉及果树抗性资源的筛选和评价，主要步骤包括：猕猴桃资源的组织培养；组培苗的继代培养；组培苗的PEG模拟干旱处理；旱害指数的统计分析；耐旱性的鉴定。该方法简单易操作，因选用的材料为生长一致的组培苗，能够保证鉴定结果的准确性和可靠性，快速筛选耐旱猕猴桃种质资源，也可为其他果树资源的抗性鉴定提供借鉴。

主权项

1.一种耐旱猕猴桃资源的鉴定方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：1)猕猴桃资源的组织培养；2)组培苗的继代培养；和3)组培苗的模拟干旱处理；在培养基中添加不同浓度的聚乙二醇制得PEG模拟干旱培养基，并将步骤2)获得猕猴桃组培苗，接入所述PEG模拟干旱培养基中，培养观察；所述步骤3)中组培苗的模拟干旱处理方法为：(1)PEG模拟干旱培养基的配制配制1/2MS‑PEG培养基，所述1/2MS‑PEG培养基中大量元素、微量元素、有机质和铁盐都减半，加入30g/L的蔗糖，不加激素和琼脂，分别加入质量分数为0、10％、20％、30％和40％的PEG8000，配制出含有不同浓度PEG8000的1/2MS‑PEG培养基；配制固体增殖培养基，将液体1/2MS‑PEG培养基加入到冷却后的固体增殖培养基中，液体1/2MS‑PEG培养基和固体增殖培养基体积比为1:1，平衡24‑72h后，将固体增殖培养基表面的液体培养基倒掉，得到0、5％、10％、15％和20％的PEG模拟干旱培养基；所述固体增殖培养基为MS培养基+1.0mg/L ZT，琼脂6‑10g/L，pH5.8；或MS培养基+1.0mg/L ZT+0.5mg/L GA3，琼脂6‑10g/L，pH5.8；(2)挑选具有3～4片小叶、高度1.5～2cm的生长一致的各猕猴桃组培苗，接入不同浓度的PEG模拟干旱培养基中，进行组培苗的模拟干旱处理；每个处理每份资源接苗10瓶，每瓶3颗，共计30颗小苗；4)旱害指数的统计分析；和5)耐旱性鉴定；所述步骤4)中旱害指数的统计分析方法为：干旱胁迫30天后，根据每个PEG浓度下组培苗所表现出来的受害症状进行统计分析，旱害指数的分级标准如下：Ⅰ叶片和植株均生长正常，无旱害症状；Ⅱ叶片有轻度发黄或发褐，主要表现在叶缘或叶尖部位；Ⅲ叶片有干枯症状，叶片数量明显减少，植株矮化，生长受到抑制；Ⅳ叶片或茎段干枯，伴有叶片脱落，植株矮化，几乎不生长；依据下列公式计算各猕猴桃资源的旱害指数：DDI＝∑(x×n)/(4N)×100x‑‑各级旱害级数值n‑‑不同浓度下各旱害级株数的总和N‑‑调查的总植株数。