[发明专利]一种无重组生长因子添加的精原干细胞培养体系及应用

摘要

一种无重组生长因子添加的精原干细胞培养体系及应用，包括成分明确的精原干细胞培养基和过表达生长因子GDNF的滋养层细胞。利用本发明方法，可以长期体外培养精原干细胞，通过移植实验验证其干细胞特性与传统培养方法所培养的精原干细胞无差异。与传统培养方法相比，无需添加任何昂贵的重组生长因子及胎牛血清，培养基成分十分清晰，重复性好。应用本发明方法所培养的精原干细胞具备完整的再生潜能和无限增殖的能力。本发明方法培养简便，经济且高效。

主权项

一种无重组生长因子添加的精原干细胞培养体系，其特征在于包括含十二种明确化学成分组成的培养基和过表达生长因子GDNF的滋养层，所述培养基每500mL含有牛血清白蛋白0.6wt.%，转铁蛋白100μg/mL，不饱和脂肪酸15.2μeq/L，亚硒酸钠6×10‑8M， 2‑巯基乙醇100μM，胰岛素25μg/mL， 4‑羟乙基哌嗪乙磺酸10mM，腐胺120μM，青霉素50units/mL，链霉素50μg/mL， L‑谷氨酰胺2mM，其余为基础培养基MEMα，0.22μm滤器过滤；每毫升所述不饱和脂肪酸包括：亚麻酸5.6mM，十八烯酸13.4 mM，棕搁油酸2.8 mM，亚油酸35.6 mM，十六烷酸31 mM，十八酸11.6 mM，无水乙醇为溶剂；所述的过表达生长因子GDNF的滋养层细胞每2×105细胞24小时GDNF分泌量为4.13ng/mL。