[发明专利]阿卡波糖生产菌Actinoplanes spp.的遗传操作体系有效
| 申请号： | 201610962757.8 | 申请日： | 2016-10-28 |
| 公开（公告）号： | CN106566796B | 公开（公告）日： | 2020-11-10 |
| 发明（设计）人： | 白林泉;赵芹芹 | 申请（专利权）人： | 上海交通大学 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/74;C12N15/03;C12P19/26;C12R1/045 |
| 代理公司： | 上海科盛知识产权代理有限公司 31225 | 代理人： | 杨元焱 |
| 地址： | 200240 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： |
一种阿卡波糖生产菌Actinoplanes spp.的遗传操作体系，是利用菌丝体接合转移的方式，将 |
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| 搜索关键词： | 阿卡波糖 生产 actinoplanes spp 遗传 操作 体系 | ||
【主权项】：
一种阿卡波糖生产菌Actinoplanes spp.的遗传操作体系，是利用菌丝体接合转移的方式，将衍生质粒和pIJ101衍生的复制型质粒导入阿卡波糖生产菌株Actinoplanes spp.中，实现基因的表达和敲除，具体步骤如下：A.将构建的重组质粒转化至ET12567(pUZ8002)，挑取正确的菌株，经8h培养后，转接至新鲜的LB培养基中继续培养4‑5h，至OD600nm为1；B.将Actinoplanes spp.菌丝体划线于平板培养基上，30℃培养3‑4天，接种至菌丝体液体培养基，培养36h后，转接至TSB培养基培养8‑12h；C.将菌丝体和含有重组质粒的ET12567(pUZ8002)按照菌体数量为1：30比例混合均匀，涂布于SFM平板上，置于30℃培养箱中培养32h，每块平板分别以2mg阿泊拉霉素和甲氧苄啶覆盖，继续培养6‑7天，获得接合子。
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