[发明专利]一种连香树的体外培养方法

摘要

本发明属于细胞培养技术领域，涉及一种连香树的体外培养方法。以连香树授粉种子为外植体，将其置于愈伤组织诱导培养基上诱导愈伤组织、愈伤组织的增殖、胚性愈伤组织的诱导和增殖、体细胞胚胎的分化、植株再生。本发明方法培育周期在175天左右、再生植株成活率达到85%以上。

主权项

一种连香树的体外培养方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤 ：1）愈伤组织的诱导：以连香树授粉的种子中未成熟合子胚为外植体，将其置于愈伤组织诱导培养基上诱导愈伤组织；所述愈伤组织诱导培养基是在MS基本培养基的基础上添加了6‑苄基腺嘌呤、2,4‑二氯苯氧乙酸和活性炭（AC）；2）愈伤组织的增殖：将步骤1）诱导后的愈伤组织置于增殖培养基上增殖，所述增殖培养基是在MS基本培养基的基础上添加了浓度为0.001‑1.0 mg/L的6‑苄基腺嘌呤，浓度为0.001‑1.0 mg/L的2,4‑二氯苯氧乙酸和浓度为0.05‑1.0 g/L活性炭；3）胚性愈伤组织的诱导和增殖：将步骤2）增殖后的愈伤组织置于诱导培养基上诱导胚性愈伤组织，并在胚性愈伤组织增殖培养基上继代增殖；所述的胚性愈伤组织诱导、增殖培养基是在MS基本培养基的基础上添加了浓度为0.001‑2.0 mg/L 的6‑苄氨基嘌呤，浓度为0.001‑2.0 mg/L的α‑萘乙酸和浓度为0.05‑1.0 g/L活性炭；4）体细胞胚胎的分化：将经步骤3）继代增殖后的胚性愈伤组织置于分化培养基上诱导体细胞胚胎分化；所述的分化培养基是在MS基本培养基的基础上添加了浓度为0.001‑1.0 mg/L的6‑苄氨基嘌呤，浓度为0.001‑2.0mg/L的α‑萘乙酸和浓度为0.05‑1.0 g/L的活性炭；5）植株再生：将经步骤4）分化出的体细胞胚胎置于再生培养基上诱导体胚萌发，得到连香树再生苗；所述方法步骤1）中愈伤组织诱导培养基中6‑苄氨基嘌呤的浓度为0.001‑1.0 mg/L，2,4‑二氯苯氧乙酸的浓度为0.001‑2.0 mg/L，活性炭的浓度为0.05‑1.0 g/L；所述步骤5）所述的植株再生培养基是在MS基本培养基的基础上添加了浓度为0.1‑1.0 mg/L 的吲哚丁酸。