[发明专利]一种基于愈伤组织分化的香椿再生体系

摘要

本发明提供了一种基于愈伤组织分化的香椿再生体系，包括香椿无菌外植体的获得、将外植体置于诱导培养基中培养形成愈伤组织、将愈伤组织用基本培养基培养然后移植至分化培养基中培养并继代形成芽、将芽在分化培养基中培养长成有4‑6片以上子叶后用基本培养基继代然后移植到生根培养基中生根形成幼苗、将幼苗用生根培养基培养后练苗再移栽等步骤。本发明是一种繁殖系数高、速度快、有利于推广栽培优良品种的基于愈伤组织分化的香椿再生体系，愈伤组织诱导率均为100%、生根苗长成再生植株成活率超过96％；本发明能用于快繁名贵优良香椿品种，实现良种规模化生产，满足大棚或温室栽培需要，加快优质香椿品种的应用，具有较大的市场价值。

主权项

1.一种基于愈伤组织分化的香椿再生体系，其特征在于包括如下步骤：1）、香椿无菌外植体的获得；2）、愈伤组织诱导：将步骤1）所述外植体置于诱导培养基中培养，诱导形成愈伤组织；3）、愈伤组织分化：将步骤2）所述的愈伤组织转移至基本培养基中培养，在湿度70 ％，培养温度23℃，黑暗条件下连续培养1‑2周后，移植至分化培养基中，培养、继代形成芽；4）、幼苗生根培养：将步骤3）所述的芽在所述分化培养基中，湿度70 ％，温度为光照25℃/黑暗23℃，光照强度为30‑50μ mol photons ﹒ m‑2 s‑1 ，光周期13 h／11h，生长3‑4周，长成有4‑6片以上子叶后，清除茎部愈伤组织，将茎叶部分继代至所述基本培养基中培养2周后移植到生根培养基中培养，至开始生根形成幼苗；5）、移栽将步骤4）所述幼苗移入三角瓶中封上封口膜，在生根培养基中生长4‑5周后，选择2条根以上，株高3‑4cm，展开叶3‑5片的植株，揭开三角瓶封口膜，炼 苗4‑6天后，自来水冲洗去苗基部的培养基，移栽到蛭石、泥炭、珍珠岩以质量比为3：1：1混合的基质中，用薄膜罩遮阴并保持湿度在70‑80％，15天后去掉薄膜罩，定期喷洒40 ％多菌灵800倍液杀菌，一周一次，共计2‑3次；其中，所述基本培养基包括大量元素、微量元素、铁盐和有机物，所述大量元素含有2100mg/L的KNO3、1430mg/L的NH4NO3、270mg/L的MgSO4·7H2O、150mg/L的KH2PO4、320mg/L的CaCl2·2H2O；所述微量元素含有12mg/L的MnSO4·4H2O、5.7mg/L的ZnSO4·7H2O、4.2mg/L的H3BO3、0.50mg/L的KI、0.20mg/L的Na2MoO4·7H2O、0.025mg/L的CuSO4·5H2O、0.025mg/L的CoCl2·6H2O；所述铁盐含有37.3mg/L的Na2‑EDTA、27.8mg/L的FeSO4·4H2O；所述有机物含有1.5mg/L的甘氨酸、0.5mg/L的盐酸吡哆醇、0.15mg/L的盐酸硫铵素、0.6mg/L的烟酸、80mg/L的肌酸；所述诱导培养基为基本培养基+1.0 mg /L6‑BA+0.5 mg/L 2,4‑D+0.1 mg/L TDZ +质量百分比0.8%的琼脂；所述分化培养基为基本培养基+0.8 mg/ L 6‑BA+0.2 mg/L 2,4‑D+0.2 mg/L TDZ+质量百分比0.8%的琼脂；所述生根培养基为基本培养基+0.01 mg/L NAA+0.05 /Lmg ZT+质量百分比0.8%的琼脂；步骤5）中所述基质在使用前用质量百分比浓度为0.1%的高锰酸钾均匀喷施，以基质透水为一次，处理三次；步骤1）所述的香椿无菌外植体的获得方式为：香椿种子去种皮后在无菌水中浸泡6‑12 h后，无菌条件下用体积百分比为70 %酒精处理3 min，再用无菌水清洗4~5次，接种到基本培养基中，培养条件为：湿度70 ％，培养温度光照25℃/黑暗23℃，光照强度为30‑50μ mol photons ﹒ m‑2 s‑1 ，光周期13 h／11h的条件下，7 d后，香椿无菌苗开始形成，20 d后的香椿无菌植株的叶片切为1.5毫米的方块作为愈伤组织诱导的外植体；或者，挑选自然状态下生长的健壮香椿幼叶，用清水冲洗30分钟后，质量百分比浓度为1%次氯酸钠处理1.5分钟，后用体积百分比为70 %酒精处理3 min，再用无菌水清洗4 ~5次后，切成1.5毫米见方的小块，作为外植体，置于诱导培养基中；步骤2）所述的将外植体置于诱导培养基中培养的条件为：湿度70 ％，培养温度光照25℃/黑暗23℃，光照强度为30‑50μ mol photons ﹒ m‑2 s‑1 ，光周期13 h／11h的条件下，1‑2周后，愈伤组织开始形成；步骤3）所述的在分化培养基中，培养、继代形成芽的条件为：培养温度光照25℃/黑暗23℃，光照强度为40‑60μ mol photons ﹒ m‑2 s‑1 ，光周期13 h／11h的条件下，每隔2‑3周继代一次，连续继代2‑3次后芽开始形成；步骤4）所述的在生根培养基中培养，至开始生根形成幼苗的条件为：湿度70 ％，培养温度光照25℃/黑暗23℃，光照强度为30‑50μ mol photons ﹒ m‑2 s‑1 ，光周期13 h／11h的条件下，2‑3周后开始生根。