[发明专利]一种内皮祖细胞氧化应激模型的构建方法在审

专利信息
申请号: 201610932351.5 申请日: 2016-10-25
公开(公告)号: CN106434529A 公开(公告)日: 2017-02-22
发明(设计)人: 梁盈;李佳佳;林亲录;王玉倩;马酉初;张琳 申请(专利权)人: 中南林业科技大学
主分类号: C12N5/071 分类号: C12N5/071
代理公司: 长沙正奇专利事务所有限责任公司43113 代理人: 郭立中;周栋
地址: 410004 *** 国省代码: 湖南;43
权利要求书: 查看更多 说明书: 查看更多
摘要: 发明涉及一种内皮祖细胞氧化应激模型的构建方法,将购买的人外周血单个核细胞接种在人纤连蛋白涂层(FN)的培养皿中培养,加入M199培养基,培养箱中培养。3天后洗去未贴壁细胞,添加培养液继续培养,以后每隔3天换培养液。用胰酶消化细胞制成细胞悬液,取适量的内皮祖细胞悬液,加入等体积的氧化低密度脂蛋白,其终浓度为100μg/mL,培养箱中培养24h。将细胞再次用胰酶消化,离心后,细胞样用MTT法测定其生长抑制率,用流式细胞仪测定凋亡情况,并测定活性氧,GSH‑Px和线粒体膜电位等代表其氧化应激情况的参数。本发明提供了一种在细胞水平研究抗氧化物质及其机理的模型,且是首次用氧化低密度脂蛋白作为诱导物建立内皮祖细胞氧化应激模型。
搜索关键词: 一种 内皮 细胞 氧化 应激 模型 构建 方法
【主权项】:
一种内皮祖细胞氧化应激模型建立的方法,其特征在于,所述方法包括如下步骤:(1)将购买的人外周血单个核细胞接种在人纤连蛋白涂层的多孔培养板中培养,每孔加入1mL M199培养液,于37℃,5%CO2饱和湿度的培养箱中培养;(2)培养2—4d后洗去未贴壁细胞,添加M199培养液继续培养,以后每隔2—4d换M199培养液;(3)用胰酶消化经步骤(2)培养的细胞制成细胞悬液,取细胞悬液并加入与细胞悬液等体积的氧化低密度脂蛋白,得混合液,氧化低密度脂蛋白在混合液中的终浓度为50至200μg/mL;再于37℃5%CO2饱和湿度的培养箱中培养20—30h;(4)用胰酶消化经步骤(3)培养的细胞,离心后用PBS洗涤,然后用MTT法测定细胞生长抑制率,用细胞样用流式细胞仪测定细胞凋亡情况,并测定代表细胞氧化应激情况的参数,构建成内皮祖细胞氧化应激模型。
下载完整专利技术内容需要扣除积分,VIP会员可以免费下载。

该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息,商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于中南林业科技大学,未经中南林业科技大学许可,擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作,请联系【客服

本文链接:http://www.vipzhuanli.com/patent/201610932351.5/,转载请声明来源钻瓜专利网。

×

专利文献下载

说明:

1、专利原文基于中国国家知识产权局专利说明书;

2、支持发明专利 、实用新型专利、外观设计专利(升级中);

3、专利数据每周两次同步更新,支持Adobe PDF格式;

4、内容包括专利技术的结构示意图流程工艺图技术构造图

5、已全新升级为极速版,下载速度显著提升!欢迎使用!

请您登陆后,进行下载,点击【登陆】 【注册】

关于我们 寻求报道 投稿须知 广告合作 版权声明 网站地图 友情链接 企业标识 联系我们

钻瓜专利网在线咨询

周一至周五 9:00-18:00

咨询在线客服咨询在线客服
tel code back_top