[发明专利]一种基于功能肽R9修饰的PEG化Fe3+/PEI基因载体及其制备方法和应用

摘要

本发明涉及一种基于功能肽R9修饰的PEG化Fe³⁺/PEI基因载体及其制备方法和应用。所述基因载体包含聚乙二醇修饰的Fe³⁺/聚乙烯亚胺与功能肽R9所形成的偶联物。优点：本发明首先通过金属离子Fe³⁺与PEI反应，加以PEG修饰，形成PEG化Fe³⁺/PEI，然后合成具有提高核递送能力和靶向于αvβ3的功能肽R9，利用交联技术将R9与PEG‑Fe³⁺/PEI衍生物偶联，从而构建新型非病毒基因载体系统PEG‑Fe³⁺/PEI。本发明在降低PEI细胞毒性的基础上，通过提高其在体内的靶向性和核递送能力，进而提高载体在体内的转染效率，为基因治疗最终应用于临床探索有效途径。

主权项

1.一种基于功能肽R9修饰的PEG化Fe³⁺/PEI基因载体，其特征在于，所述基因载体包含聚乙二醇修饰的Fe³⁺/聚乙烯亚胺与功能肽R9所形成的偶联物，所述Fe³⁺/聚乙烯亚胺是由金属离子Fe³⁺与聚乙烯亚胺通过配位聚合作用形成的聚乙烯亚胺衍生物；所述功能肽R9的氨基酸序列为：Arg‑Gly‑Asp‑Cys‑Lys‑Lys‑Lys‑Arg‑Lys；所述聚乙烯亚胺的分子量为5KDa；所述聚乙烯亚胺与金属离子Fe³⁺的摩尔比为1:6；所述聚乙二醇修饰的Fe³⁺/聚乙烯亚胺与功能肽R9的摩尔比为1:5；所述基于功能肽R9修饰的PEG化Fe³⁺/PEI基因载体的制备方法包括如下步骤：1)合成功能肽R9，所述功能肽R9的氨基酸序列为：Arg‑Gly‑Asp‑Cys‑Lys‑Lys‑Lys‑Arg‑Lys；2)将FeCl₃·6H₂O、PEI、乙烯砜、PEG‑NHS分别用超纯水溶解，依次加入到吐温80的环己烷溶液中，反应结束后，向乳浊液中加入乙醇，离心，除去上清液，反复进行三次，最后离心完毕后，对沉淀进行溶解，即得PEG‑Fe³⁺/PEI聚合物溶液；3)SMCC溶解于DMSO溶液中，功能肽R9与PEG‑Fe³⁺/PEI分别溶解于PBS溶液中，将SMCC溶液加入PEG‑Fe³⁺/PEI液中，反应30mim得到马来酰亚胺化的PEG‑Fe³⁺/PEI；4)将功能肽R9溶液加入马来酰亚胺化的PEG‑Fe³⁺/PEI溶液中，反应得到PEG‑Fe³⁺/PEI‑R9。