[发明专利]一种具有同时高效脱硫脱氮活性的菌株筛选方法

摘要

本发明提供了一种具有同时高效脱硫脱氮活性的菌株筛选方法，属于生物技术领域，它包括以下步骤：第一步初筛、第二步纯化分离、第三步生化培养和第四步增殖培养。本发明的筛选方法，通过设置筛选及培养条件，能够得到具有较高脱硫脱氮活性的菌株，本筛选方法得到的菌株硫化物降解效率高于99%，氨氮降解效率高于70%；本菌株可节约水处理设施投资，且保证污水处理效果；可减少处理药剂和能源消耗的投入，降低污水处理成本，处理成本至少降低0.20元/方；无二次污染，可最终消除其对周围水环境和大气环境的影响；再者，可以应用于石化废水和生活污水处理中，具有良好的环境和社会效益。

主权项

1.一种具有同时高效脱硫脱氮活性的菌株筛选方法，其特征在于，包括：第一步初筛、第二步纯化分离、第三步生化培养和第四步增殖培养；具体的：第一步初筛的程序为：取20‑30g活性污泥放入盛有初筛培养基的培养皿中，将培养皿放入25‑30℃恒温摇床中培养，保持恒温摇床的转速为180‑185转/min，培养时间为4‑5天，所述活性污泥为油田采出水处理厂生化污泥、灰场生化污泥或者生活污水处理厂曝气池；第二步纯化分离的程序为:将第一步摇床培养后的培养皿中的菌种接种至固体培养基，将接种菌种后的固体培养基放在25‑30℃的生化培养箱培养2‑3天；第三步生化培养的程序为：从经过第二步的培养基中挑取划线分离得到的单菌落分别放至初筛培养基中，在25‑30℃、180‑185转/min的摇床培养8‑10天，培养后取2ml菌液至放有100‑150ml厌氧培养基的厌氧瓶中，然后将厌氧瓶放入25‑30℃生化培养箱25‑30天；再将厌氧瓶放至30℃厌氧培养罐中，培养25天，在培养的过程中充5min的N₂或持续充N₂得到菌株；第四步增殖培养的程序为：将各菌株分别接种到装有130‑150 ml的脱氮除硫培养基中进行增殖培养，放入35‑37℃振荡培养箱中培养7天，得到具有同时高效脱硫脱氮活性的菌株；其中，所述初筛培养基由13‑15g Na₂S₂O₃、7‑9g KNO₃、5‑6g (NH₄)₂HPO₄、20‑1.5g MgCl₂、5‑6gNaHCO₃、1‑1.5g半胱氨酸、25‑30ml维生素营养液和25‑30ml微量元素营养液混合，调节pH为7.0，并经过120‑121℃、18‑20min的灭菌处理后得到；所述固体培养基由12‑15g Na₂S₂O₃、5‑7g KNO₃、7‑9g (NH₄)₂HPO₄、1‑1.5g MgCl₂、6‑7g NaHCO₃、1.3‑1.5g半胱氨酸、10‑12g琼脂、0.1‑0.15g活性炭、1.8‑2g甘露糖、28‑30ml维生素营养液和28‑30ml微量元素营养液混合而成；所述厌氧培养基由0.02‑0.025g MnSO₄、10‑12g Na₂S₂O₃、1‑1.2g Na₂HPO₄、1.5‑1.8g KH₂HPO₄、1‑1.5g NaHCO₃、0.4‑0.5g MgSO₄•7H₂O、0.5‑0.6g NH₄Cl、0.05‑0.1g CaCl₂、0.02‑0.05g FeCl₃和5‑5.5g KNO₃混合后煮沸晾凉，加0.5‰半胱氨酸后调pH至中性，然后加1‑1.2ml指示剂，充N₂装瓶，经过120‑121℃，20‑25min的灭菌得到；所述脱氮除硫培养基由10‑12g蛋白胨、3‑3.5g牛肉膏、5‑6g NaCl、1‑1.5g KNO₃、1‑2mg环己六醇、3‑6mg 6‑苄氨基嘌呤、0.5‑0.8g半胱氨酸和20‑25g琼脂混合，并调pH至7.2得到；所述维生素营养液中硫胺素为0.12‑0.15μg /L、吡哆醇为0.13‑0.15μg /L、泛酸钙为0.15‑0.2μg /L和烟酸为0.11‑0.15μg /L；所述微量元素营养液的成分为碘化钾0.5‑0.65mg/L、硫酸锌5‑7mg/L、氯化钴0.02‑0.05mg/L、硫酸铜0.02‑0.05mg/L、生物素0.3‑0.5mg/L、蛋氨酸0.2‑0.5mg/L、苏氨酸0.28‑0.3mg/L。