[发明专利]一种雨生红球藻提取物中虾青素的分离检测方法

摘要

本发明涉及一种雨生红球藻提取物中虾青素的分离检测方法，包括以下步骤步骤一，雨生红球藻提取物中类胡萝卜素的提取；步骤二，类胡萝卜素的酶解；步骤三，正相高效液相分析法分离检测虾青素液相上机条件为检测波长在474nm，色谱柱为Luna 3μ Silica(2)，色谱柱温度20‑25℃，流速1‑1.2ml/分钟，流动相为正己烷丙酮体积比＝75％25％‑90％10％，等度洗脱。本发明的前处理效率高，提取试剂丙酮与虾青素的互溶性好，酶解相对于皂化时间短，效率高；高效液相色谱上机条件好等度洗脱，基线更易平稳，峰形好，分离度高，可以分离更多的同分异构体；出峰时间短，不易受外界光热影响，更适合大批量检测。

主权项

一种雨生红球藻提取物中虾青素的分离检测方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一，雨生红球藻提取物中类胡萝卜素的提取：按照雨生红球藻提取物与丙酮质量体积比1：20‑200的比例将两者混合均匀，离心去沉淀，留取上清液；步骤二，类胡萝卜素的酶解：向步骤一中的上清液中加入终浓度0.01‑0.1M pH7.0的Tris‑HCl缓冲液，混匀后加入胆固醇酯酶，加入量为20‑350U/mg提取物，37℃酶解30‑60分钟；酶解完后向酶解液中加入0.5‑2g无水硫酸钠除水和1‑2ml石油醚萃取，离心，收集石油醚层；重复萃取步骤，直至萃取完全，合并石油醚层，用氮气或惰性气体吹干，加入洗脱液溶解，并定容至与被酶解的上清液体积相同，得到待测液；所述洗脱液为正己烷与丙酮的混合液，正己烷：丙酮体积比＝75％:25％‑90％:10％；步骤三，正相高效液相分析法分离检测虾青素：液相上机条件为：检测波长在474nm，色谱柱为Luna 3μSilica(2)，色谱柱温度20‑25℃，流速1‑1.2ml/分钟，流动相为正己烷：丙酮体积比＝75％:25％‑90％:10％，等度洗脱；分别运行样品：反式虾青素标准溶液，待测液；运行反式虾青素标准溶液后，计算峰值面积PSTA；运行待测液后，分别计算双顺式虾青素#1的峰值面积PDCA1，双顺式虾青素#2的峰值面积PDCA2，反虾青素的峰值面积PTA，9‑顺式虾青素的峰值面积P9CA，13‑顺式虾青素的峰值面积P13CA，15‑顺式虾青素的峰值面积P15CA；虾青素的峰值面积率PARAX为：PARAX＝(PDCA1+PDCA2+PTA+1.133×P9CA+1.60×P13CA+P15CA)÷PSTA虾青素含量百分比AXP为：AXP＝(PARAX×CSTA×D×100)÷W式中，CSTA为反式虾青素标准溶液的浓度，W为步骤一中雨生红球藻提取物的重量，D为步骤一中溶解雨生红球藻提取物所用丙酮的体积；所述雨生红球藻提取物为雨生红球藻来源的虾青素油酯或虾青素胶囊或雨生红球藻破壁后的产物。