[发明专利]利用CRISPR/Cas9技术敲除人PD‑1基因构建可靶向MSLN新型CAR‑T细胞的方法及其应用在审

专利信息
申请号: 201610891327.1 申请日: 2016-10-13
公开(公告)号: CN106480097A 公开(公告)日: 2017-03-08
发明(设计)人: 代红久;李晓亮;孙彬;张征;赵旭东;熊波 申请(专利权)人: 南京凯地生物科技有限公司
主分类号: C12N15/867 分类号: C12N15/867;C12N5/10;A61K35/17;A61P35/00
代理公司: 苏州中合知识产权代理事务所(普通合伙)32266 代理人: 马丽丽
地址: 211100 江苏*** 国省代码: 江苏;32
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摘要: 发明公开了一种利用CRISPR/Cas9技术敲除人PD‑1基因构建可靶向MSLN新型CAR‑T细胞的方法,该方法利用CRISPR/Cas9技术通过使用携带人PD‑1基因sgRNA和Cas9‑HF核酸酶的病毒液同步感染CAR‑T细胞来敲除人PD‑1基因,得到可靶向MSLN新型CAR‑T细胞。该新型CAR‑T细胞可用来制备用于治疗实体肿瘤的制剂。该制备方法步骤简单、获得的CAR‑T细胞对实体肿瘤细胞的杀伤率高。
搜索关键词: 利用 crispr cas9 技术 pd 基因 构建 靶向 msln 新型 car 细胞 方法
【主权项】:
一种利用CRISPR/Cas9技术敲除人PD‑1基因构建可靶向MSLN新型CAR‑T细胞的方法,其特征在于,所述方法利用CRISPR/Cas9技术通过使用携带人PD‑1基因sgRNA和Cas9‑HF核酸酶的病毒液同步感染CAR‑T细胞来敲除人PD‑1基因,得到可靶向MSLN新型CAR‑T细胞;其中,人PD‑1基因的mRNA序列由SEQ ID No.46至SEQ ID No.50所示的人PD‑1基因外显子组成,靶向sgRNA序列由SEQ ID No.51至SEQ ID No.56所示的人PD‑1基因靶向sgRNA序列PD‑1‑Tn组成;Cas9‑HF核酸酶由序列表SEQ ID No.57至SEQ ID No.60所示的Cas9‑HF‑NLS‑FLAG核酸酶序列组成。
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