[发明专利]神经元细胞培养液及培养方法有效

专利信息
申请号: 201610890624.4 申请日: 2016-10-12
公开(公告)号: CN106367390B 公开(公告)日: 2019-12-31
发明(设计)人: 高歌;陈瑛 申请(专利权)人: 上海爱萨尔生物科技有限公司
主分类号: C12N5/0793 分类号: C12N5/0793
代理公司: 31292 上海领洋专利代理事务所(普通合伙) 代理人: 刘秋兰
地址: 201203 上海*** 国省代码: 上海;31
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摘要: 发明公开了一种基于外周血单核细胞培养神经元细胞的培养液,所述培养液包括:体积比为1:0.8~1.2的DMEM/F12基础培养基和神经细胞培养基,以及神经生长因子、腺苷酸环化酶激活剂、血清替代物、L‑抗坏血酸、L‑谷氨酰胺衍生物、ALK抑制剂、GSK‑3β抑制剂、GSK3α抑制剂、ALK‑2,3,6,AMPK抑制剂和TGF‑βR抑制剂。本发明还公开了一种由外周血单核细胞培养神经元细胞的方法,使用所述培养液,可以外周血单核细胞为原料定向分化培养得到神经元细胞,取材方便,且无数量限制,可避免道德争议。
搜索关键词: 神经元 细胞 培养液 培养 方法
【主权项】:
1.一种基于外周血单核细胞的神经元细胞培养液,其特征在于,所述培养液由:体积比为1:0.8~1.2的DMEM/F12基础培养基和神经细胞培养基Neurobasal,以及神经生长因子、腺苷酸环化酶激活剂、血清替代物、L-抗坏血酸、L-谷氨酰胺衍生物、ALK抑制剂、GSK-3β抑制剂、GSK3α抑制剂、ALK-2,3,6,AMPK抑制剂、TGF-βR抑制剂和视黄酸组成,所述神经生长因子为Beta人类神经生长因子;所述腺苷酸环化酶激活剂为毛喉素;所述L-谷氨酰胺衍生物为GlutaMAX-I二肽;所述血清替代物为N2和/或B27;所述ALK抑制剂为LDK378和/或AZD3463;所述GSK-3β抑制剂为TWS119、CHIR-98014和/或CHIR-99021HCl;所述GSK3α抑制剂为SB415286;所述ALK-2,3,6,AMPK抑制剂为BML-275、BML-2752HCl和/或LDN-193189;所述TGF-βR抑制剂为EW-7197和/或SB-505124;/n所述神经生长因子浓度为6~12μg/mL,所述腺苷酸环化酶激活剂浓度为2~4μmol/L,所述血清替代物浓度为2~4mmol/L,所述L-抗坏血酸浓度为0.08~0.12mmol/L,所述L-谷氨酰胺衍生物浓度为6~12mmol/L,所述ALK抑制剂浓度为0.16~0.22mmol/L,所述GSK-3β抑制剂浓度为0.58~0.63mmol/L,所述GSK-3α抑制剂浓度为0.48~0.60mmol/L,所述ALK-2,3,6,AMPK抑制剂浓度为0.15~0.23mmol/L,所述TGF-βR抑制剂浓度为0.18~0.25mmol/L,所述视黄酸浓度范围为0.01~0.28mmol/L。/n
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