[发明专利]一种深层发酵制备蛹虫草菌种的生产方法

摘要

本发明公开了一种深层发酵制备蛹虫草菌种的生产方法，每次制备液体菌种的数量大大提高，比原来的摇床振荡法高出6～7倍；易于控制，液体菌种的制备成功率高；发酵罐的水循环降温及温度电控，可以很好的控制液体菌种的制备温度，从而确保液体菌种制备的效率和成功率；此方法制备的液体菌种具有密度大、菌球多、活力强等优点。

主权项

1.一种深层发酵制备蛹虫草菌种的生产方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）母种活化将蛹虫草菌种接种到试管母种培养基中，于23～25℃恒温培养箱中培养8～10天，获得活化的蛹虫草菌；所述的蛹虫草菌种是采用生长正常、健壮、无病虫害的新鲜野生蛹虫草作为分离材料；经消毒后切取得到的小菌块；或是采用国内各名优食用菌研究所购进的蛹虫草菌种；所述的母种培养基配制方法是：称取马铃薯200克，洗净、切成小块后加蒸馏水，沸水煮30分钟，取其煮汁以及葡萄糖24克、蛋白胨3克、磷酸二氢钾0.5克、硫酸镁1.0克、琼脂20克、维生素B11.0克，加蒸馏水定容至1000毫升，pH自然，121℃高压灭菌25～30 分钟，待温度降至25℃以下后使用；（2）一级摇瓶种子培养将从活化的蛹虫草菌菌体上切取得到的菌块转接至装有一级摇瓶培养基的三角瓶中，静置培养2天，然后置于摇床上，于19～20℃、100～120转/分钟震荡培养5～7天，得到一级摇瓶菌种液；所述的一级摇瓶培养基配制方法是：称取马铃薯200克，洗净、切成小块后加蒸馏水，沸水煮30分钟，取其煮汁以及葡萄糖10克、蛋白胨2克、蚕蛹粉10g、磷酸二氢钾0.5克、硫酸镁1.0克、维生素B11.0克，加蒸馏水定容至1000毫升，pH自然，将配好的培养基分装于三角瓶中，装料量为三角瓶容量的1/4～1/2，用棉塞和牛皮纸扎封瓶口，于121℃高压灭菌25～30分钟，待温度降至25℃以下后使用；（3）发酵罐空消往发酵罐内加入纯净水至观察镜上方即可，同时加热夹层注入纯净水至夹层观察镜镜面2/3处，将发酵罐温度控制器设定加热温度121℃，通电开始加热；温度达到121℃时开始计时，并从夹层通蒸汽给管道、蒸汽过滤器、空气过滤器灭菌，30min即可，30min到后，关闭夹层出蒸汽阀，开启空气进气阀，将管路及滤芯吹干，时间30min，吹滤芯时间到点后，空消的1h时间也到点了，设定温度控制器至19℃，电加热器自动关闭，通过开大罐体出气阀及夹层排气阀，待夹层没有压力及温度降至100℃以下时，通入无菌空气开启搅拌冷却至19℃即可；（4）发酵罐实消根据发酵罐容积及装料系数称取所需培养料，完成后混匀并加水至指定液位；将发酵罐温度控制器设定加热温度121℃，通电开始加热；温度达到121℃时开始计时，并从夹层通蒸汽给管道、蒸汽过滤器、空气过滤器灭菌，30min即可，30min到后，关闭夹层出蒸汽阀，开启空气进气阀，将管路及滤芯吹干，时间30min，吹滤芯时间到点后，实消的1h时间也到点了，设定温度控制器至19℃，电加热器自动关闭，并进入保温程序，通过开大罐体出气阀及夹层排气阀，待夹层没有压力及温度降至100℃以下时，夹层通入自来水，通入无菌空气开启搅拌冷却至19℃即可； 所述的发酵罐发酵培养培养基配制方法：葡萄糖2%、蛋白胨0.3%、酵母粉0.5%、硫酸镁0.1%、磷酸二氢钾0.05%、VB1 添加量为每1L培养基加入2片；（5）发酵罐接种培养 将发酵罐出气阀关小，保证罐体有一定的压力，在接种圈上绑一圈脱脂棉，用酒精浸润脱脂棉，然后把接种圈套在接种口上方，用工具拧动接种阀至松动，用打火机将脱脂棉点燃，拧开接种阀，拿到火焰上方，迅速将一级摇瓶菌种在火焰上方打开并倒入发酵罐内，然后将接种阀迅速拧紧在接种口上，调整出气阀至合适的罐压；（6）发酵液检查发酵24h后，可以通过闻罐体排气阀排出的气味，如果有异味，则出现污染，立即停止发酵并进行空消，找出染菌原因；发酵3天后可从观察镜口看菌球形成情况，并定时取样进行镜检和pH检查，检查是否染菌和pH值，待发酵液pH值到指定范围时终止发酵。