[发明专利]鼠李糖乳杆菌培养基及培养方法

摘要

本发明公开一种鼠李糖乳杆菌培养基，具有基础培养基和优化培养基，基础培养基包括组分：酵母蛋白胨、葡萄糖、酵母浸出物、乙酸钠、硫酸镁、吐温80、低聚异麦芽糖、磷酸二氢钾、余量为无菌水，pH值6.20～6.80；优化培养基包括组分：酵母蛋白胨、葡萄糖、酵母浸出物、乙酸钠、硫酸镁、吐温80、低聚异麦芽糖、磷酸二氢钾、余量为无菌水，pH值6.20～6.80。该培养基适于鼠李糖乳杆菌的繁殖培养，以及利用该培养基培养鼠李糖乳杆菌的方法，不仅能够有效增殖培养鼠李糖乳杆菌，还有利于实现大规模工业化生产。

主权项

1.鼠李糖乳杆菌的培养方法，其特征在于，包括如下步骤：1)制备发酵用菌种；1.1)划线培养：鼠李糖乳杆菌菌粉用无菌水稀释后，于MC培养基上分区划线，划线结束后，平皿倒置，37℃培养箱恒温培养48～72小时；1.2)一级纯化培养：挑取平皿上的单菌落接种至装有MRS液体培养基的试管中，试管密封，于37℃培养箱恒温静置培养17～24小时，得一级菌悬液；1.3)二级纯化培养：按3～5％接种量，将培养好的一级菌悬液接种至装有MRS液体培养基的三角瓶中，培养基装液体积占三角瓶容积的40％，三角瓶密封，于37℃培养箱恒温静置培养17～24小时，得二级菌悬液；1.4)菌泥制备与保存：将二级纯化培养得到的二级菌悬液进行离心，12000rpm离心10分钟后得到菌泥，将菌泥溶解于MRS液体培养基与50％甘油溶液的组成混合溶液中，得菌泥混合液，然后将菌泥混合液分装在已灭菌的冻存管中，封口膜密封，冻存于‑40～‑80℃低温冰箱内，得鼠李糖乳杆菌菌泥冻存管，备用；2)菌种发酵；2.1)冻存菌泥复苏：取存于低温冰箱内的鼠李糖乳杆菌菌泥冻存管，立即放入37℃水浴锅内进行菌种复苏，至冻存管内液体全部融化；2.2)菌种一级培养：将复苏好的菌泥混合液1～2ml直接接种至装有基础培养基的三角瓶中，三角瓶密封，37℃培养箱恒温静置培养17～24小时；2.3)菌种二级培养：按照2～6％接种量，将一级培养结束的菌悬液接种至装有基础培养基的三角瓶中，三角瓶密封，37℃培养箱恒温静置培养17～24小时；2.4)菌种三级培养：按照2～6％接种量，将二级培养结束的菌悬液接种至装有基础培养基的发酵罐中，开启发酵罐搅拌桨，转速为100rpm，通气量为0，37℃恒温培养8～15小时；2.5)菌种四级发酵：按照2～6％接种量，将三级培养结束的菌悬液接种至装有优化培养基的发酵罐中，开启发酵罐搅拌桨，转速为100rpm，通气量为0，37℃恒温培养，在发酵开始3小时后，维持菌液的恒pH为5.50～6.00，培养周期8～15小时，直至监测到菌悬液OD₆₀₀值停止增长，立即停止发酵，并对菌悬液做降温处理；所述基础培养基包括如下组分：酵母蛋白胨6.0～10.0g/L、葡萄糖19.0～25.0g/L、酵母浸出物2.0～4.0g/L、乙酸钠4.5～6.0g/L、硫酸镁0.4～0.6g/L、吐温80 0.5～0.75g/L、低聚异麦芽糖1.0～2.5g/L、磷酸二氢钾1.5～3.0g/L、余量为无菌水，pH值6.20～6.80；所述优化培养基包括如下组分：酵母蛋白胨11.0～15.0g/L、葡萄糖25.0～30.0g/L、酵母浸出物6.0～8.0g/L、乙酸钠2.0～3.0g/L、硫酸镁0.10～0.15g/L、吐温80 0.5～0.75g/L、低聚异麦芽糖1.0～2.5g/L、磷酸二氢钾1.5～3.0g/L、余量为无菌水，pH值6.20～6.80。