[发明专利]一种穿山甲甲片的DNA提取方法

摘要

本发明涉及一种穿山甲甲片的DNA提取方法，其包括以下步骤：1)浸泡穿山甲甲片并进行粉碎；2)取步骤1)所得粉末加入浸泡液于4℃放置过夜，离后弃上清液；3)向步骤2)所得沉淀中加入含有0.1％胶原酶和1％胰蛋白酶的PBS液在37℃处理24h‑120h，充分震荡，离心后弃上清液；4)向步骤3)所得沉淀中加入含有10mmol/L Tris‑HCl、50mmol/L NaCl、2％SDS、1mmol/L DTT、1mmol/L CaCl2和100μl蛋白酶K(10g/L)的消化液，55℃水浴72h，期间每4h震荡混匀一次，离心取上清；5)进行DNA抽提。

主权项

一种穿山甲甲片的DNA提取方法，其包括以下步骤：1)用无水乙醇浸泡穿山甲甲片10‐24h，每隔2‐3h更换一次无水乙醇，浸泡期间进行震荡清洗；然后以去离子水浸泡穿山甲甲片10‐24h，每隔2‐3h更换一次无水乙醇，浸泡期间进行震荡清洗；在60℃下烘干，然后在紫外灯下正反面分别照射灭菌，然后粉碎成细末；2)取步骤1)所得粉末置于离心管中，加入浸泡液(10mmol/L Tris‐HCl、0.2mol/L EDTA、50mmol/L NaCl、pH8.0)于4℃放置过夜，5000r/min离心10min后弃上清液；3)向步骤2)所得沉淀中加入含有0.1％胶原酶和1％胰蛋白酶的PBS液在37℃处理24h‐120h，充分震荡，10000r/min高速离心10min后弃上清液；4)向步骤3)所得沉淀中加入含有10mmol/L Tris‐HCl、50mmol/L NaCl、2％SDS、1mmol/L DTT、1mmol/L CaCl2和100μl蛋白酶K(10g/L)的消化液，55℃水浴72h‐120h，期间每4h震荡混匀一次，10000r/min离心10min取上清；5)以平衡酚以及氯仿：异戊醇(24∶1)混合液进行DNA抽提；6)以无水乙醇进行沉淀；7)以75％冰乙醇进行干燥；8)干燥所得DNA，并以TE溶解DNA。