[发明专利]具有载药和杀伤癌细胞的纳米复合纤维薄膜的制备方法

摘要

本发明提供了一种具有载药和杀伤癌细胞的纳米复合纤维薄膜的制备方法，其具有捕获并杀死循环肿瘤细胞的功能，所述纳米复合纤维首先通过静电纺丝技术制备具有羧基官能团或能改性产生羧基官能团的纳米纤维薄膜，薄膜中负载抗肿瘤药物，然后将抗‑上皮细胞粘附分子蛋白(anti‑EpCAM)枝接在纳米纤维膜表面，所制备的纳米复合纤维体系具有同时能够把循环肿瘤细胞捕获并杀死双重功能的优点；制备载有抗肿瘤药物的纳米复合纤维体系具有特异性特定捕获循环肿瘤的特性；纳米复合纤维体系借助肿瘤细胞自身周围环境的PH值可以自动释放抗肿瘤药物，达到杀死循环肿瘤细胞的目的。

主权项

1.一种具有载药和杀伤癌细胞的纳米复合纤维薄膜的制备方法，该方法采用电纺技术制备出载有抗肿瘤药物的纳米复合纤维薄膜，并对纳米复合纤维薄膜进行羧基改性，然后表面上修饰抗‑上皮细胞粘附分子蛋白，具体包括如下步骤：步骤一、制备载有抗肿瘤药物的金纳米颗粒；所述步骤一具体为：在20‑40mL金纳米粒子胶体溶液加入0.02‑0.04µL巯基乙酸甲酯，避光反应20‑26小时，将巯基乙酸甲酯修饰到金纳米粒子表面，然后再加入0.05‑0.1µL水合肼，然后在50℃搅拌，然后透析，冷冻干燥得到金纳米粒子粉末，将1‑2mg AuNPs‑NH‑NH2分散在4‑8mL含有抗肿瘤药物浓度为1 µg/mL的二甲基亚砜中，加入1‑2µL三乙胺，在氮气的保护下反应，然后透析、冷冻干燥得到修饰有抗肿瘤药物的金纳米粒子；步骤二、将步骤一制备的金纳米颗粒与聚合物溶液混合后电纺制备纳米复合纤维薄膜；所述步骤二具体为：将0.25‑1.0mg的载有抗肿瘤药物的金纳米粒子粉末均匀分散在100mg的聚合物溶液中，聚合物溶液放入静电纺丝设备中，设置电纺参数进行纺丝，得到纳米复合纤维薄膜；步骤三、对步骤二得到的纳米复合纤维薄膜进行羧基改性，再修饰anti‑EpCAM，即得到具有载药和杀伤癌细胞双功能的纳米复合纤维薄膜，具体步骤为：将纳米复合纤维薄膜表面接枝羧基官能团，得到羧基功能化的纳米复合纤维膜，将羧基功能化的复合纳米纤维膜浸入含有N‑羟基琥珀酰亚胺、1‑ (3‑二甲氨基丙基) ‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐的1, 4‑二氧六环/水混合溶液中，室温孵育1小时，之后，将薄膜从溶液中取出，置于一张干净的盖玻片上，在薄膜上滴加5‑10 μL含有抗人上皮细胞粘附分子免疫球蛋白的磷酸缓冲溶液，再用另一张干净的盖玻片盖好并轻轻挤压，使5‑10 µL溶液在膜上充分展开，之后将纤维膜于4℃潮湿环境下储存24小时，制得抗体anti‑EpCAM修饰的复合纤维薄膜。