[发明专利]一种五谷虫小分子多肽的分离方法

摘要

本发明属于中药材分离技术领域，具体涉及一种五谷虫小分子多肽的分离方法。本发明通过制备五谷虫小分子多肽冻干粉，配制母液，采用凝胶层析法分离，并对分离得到的洗脱液进行活性检测，最终分离得到具有抑菌活性的五谷虫小分子多肽。本发明分离方法操作简单、高效、快捷，稳定性、精密度、重现性比较好，为后续研究奠定了基础。

主权项

1.一种五谷虫小分子多肽的分离方法，其特征在于，包括如下步骤：A.将新鲜五谷虫加水匀浆、过滤、超声破碎、离心过滤、水浴加热、离心取上清液、超滤、冷冻干燥，得五谷虫小分子多肽冻干粉；B.向上述步骤A得到的五谷虫小分子多肽冻干粉中加入超纯水，配制成浓度为0.2‑0.6g/ml，超声波溶解，经水相滤膜过滤，得母液；C.将上述步骤B得到的母液采用凝胶层析法分离，在254nm检测波长下，收集小于10KD的S1峰，S2峰和S3峰的洗脱液，多次洗脱下来的峰液分别合并，真空冷冻干燥得冻干粉；D.将上述步骤C收集到的小于10KD的S1峰，S2峰和S3峰的洗脱液冻干粉进行菌种活性检测，得S2峰和S3峰洗脱液小肽；所述步骤A中的加入单蒸水匀浆，单蒸水的加入量是新鲜五谷虫重量的2‑4倍；所述步骤A中超声破碎条件为：超声粉碎30‑50s，重复4‑6次，强度14‑16kHz，600‑800W；所述步骤A中的水浴温度为90℃‑100℃；所述步骤A中的离心温度为4℃，10000‑12000r/min离心20‑30min；所述步骤A中的超滤，将上清液先过分子截留量为100KD的超滤膜，滤液再过分子截留量为30KD的超滤膜，得分子量为30KD以下的滤液；所述步骤B中的水相滤膜孔径为0.22μm；所述步骤C中凝胶层析法，分离条件如下：Superdex ^TM 30凝胶柱大小16mm×600mm，流动相：超纯水，流速：1.0ml/min，进样量：1ml，柱压：0.30Pa，检测波长254nm，柱温23‑27℃。