[发明专利]一种抗肿瘤的纳米颗粒药物的制备方法

摘要

本发明提供一种抗肿瘤的纳米颗粒药物的制备方法，是以依替膦酸为核心，由依替膦酸与经咪唑和甘露糖两个基团修饰后的羧甲基壳聚糖通过离子交联法制备纳米颗粒药物的方法，通过靶向到肿瘤病灶部位大量存在的M2巨噬细胞，并使其凋亡而干预肿瘤赖以生存的微环境，发挥抗恶性肿瘤的治疗效果，以解决了纳米在治疗恶性肿瘤上的靶向性，和避免了纳米粒的药物包封率，并简化抗肿瘤纳米粒药物制备的步骤；由于本发明不是采用化疗药物发挥抗肿瘤作用，因此在治疗恶性肿瘤的同时不会产生类似化疗药物的毒副作用。

主权项

1.一种抗肿瘤的纳米颗粒药物的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：①合成咪唑及甘露糖修饰的羧甲基壳聚糖：(1)、配制吗啉乙磺酸(MES)缓冲液：将MES溶于蒸馏水，配制成浓度5～50mg/ml，用NaOH将pH值调至4～7；(2)、配制O‑CMC溶液：取羧甲基壳聚糖(O‑CMC)加入到步骤(1)配制的MES缓冲液中，配浓度为1～10mg/ml O‑CMC溶液；(3)、取α‑D‑吡喃甘露糖‑4‑氨基苯基苷(MAN)加入到步骤(1)配制的MES缓冲液中，搅拌至清澈透明，得到浓度1～10mg/ml的MAN溶液；(4)、将步骤(2)配制的溶液100ml与步骤(3)配制的溶液10～100ml混合，并加入1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)70.4～704mg及N‑羟基琥珀酰亚胺(NHS)7～70mg混合搅拌，温度15～95℃，搅拌至液体完全蒸发，得到白色粉末；(5)、将步骤(1)配制的MES缓冲液100ml加入到步骤(4)得到的白色粉末中，室温搅拌至完全溶解；(6)、取1‑(3‑氨基丙基)咪唑加入到步骤(1)配制的MES缓冲液中，搅拌至清澈透明，得到浓度为1～10mg/ml的1‑(3‑氨基丙基)咪唑溶液；(7)、将步骤(5)所得溶液100ml与步骤(6)所得溶液10～100ml混合，并加入1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)152.8～1528mg及N‑羟基琥珀酰亚胺(NHS)15.3～153mg混合搅拌温度30℃，搅拌至液体完全蒸发，得到白色粉末；(8)、将步骤(7)所得的白色粉末加入到蒸馏水中，室温搅拌至完全溶解，经滤纸过滤，并清洗留下的沉淀3次，收集液体放入分子截留量800的透析袋中，双蒸水透析7天后，将透析袋内液体冷冻干燥，得到白色粉末即咪唑及甘露糖修饰的羧甲基壳聚糖(I，M‑OCMC)；(9)、将步骤(8)所得的I，M‑OCMC取100mg溶于25～100ml蒸馏水中，在室温下，以400转/分的速度，搅拌30min，配制成1～4mg/ml的I，M‑OCMC溶液，将搅拌后的溶液，滴入冰乙酸将pH值调至6，得到I，M‑OCMC溶液；②反应产生纳米粒：(10)、取依替膦酸二钠溶于蒸馏水中，配制浓度1～4mg/ml的依替膦酸二钠溶液，室温搅拌至清澈透明，取步骤(9)制备好的I，M‑OCMC溶液在室温下，以200～800转/分的速度进行搅拌，在搅拌的过程中，按I，M‑OCMC：依替膦酸二钠质量比1：1～4：1的不同比值，恒速滴入制备好的依替膦酸二钠溶液，并继续在室温下，以200～800转/分的速度搅拌15～30分钟；(11)、将搅拌后的产物放入透析袋中，并放入已加入100ml双蒸馏水的烧杯中，以100转/分的速度进行搅拌透析，每隔4小时换一次双蒸馏水溶液，透析24～48小时后，将所得产物在‑80℃的环境下冷冻真空干燥，获得纳米颗粒粉末，将粉末溶于50ml双蒸水中，采用仪器AKTApurifier蛋白纯化系统，柱子为QXL1ML，进行过柱，取过柱的液体冷冻干燥，得到咪唑及甘露糖修饰的羧甲基壳聚糖依替膦酸复合物纳米颗粒药物。