[发明专利]一种针对RANKL靶向治疗药物的生物学活性检测方法

摘要

本发明提供了一种针对RANKL靶向治疗药物的生物学活性检测方法，包括步骤取对数生长期的RAW264.7细胞，调整至合适的细胞密度进行铺板；待细胞贴壁后，将RANKL稀释至一定浓度加入铺好细胞的培养板中；再将参考品及供试品进行系列梯度稀释后依次加入细胞培养板中继续孵育一段时间；最后进行显色反应，并根据显色反应结果得出供试品的生物学活性。本发明可满足专属性、准确度、精密度(包括重复性，日间差，人员操作误差)等验证方面的要求，能够有效的应用于RANKL靶向治疗药物的筛选以及质量控制。

主权项

一种针对RANKL靶向治疗药物的生物活性检测方法，其特征在于，包括下列步骤：(1)细胞铺板：取对数生长期的检定用细胞制成细胞悬液，分别加入细胞培养板孔中，然后进行细胞培养，使细胞贴壁；(2)RANKL稀释：将RANKL按照标示浓度进行稀释，得到稀释液；(3)参考品及供试品稀释：取参考品及供试品，根据标示浓度，先预稀释至一定浓度，再进行梯度稀释，得到稀释液；(4)加样：将步骤(2)、(3)所得稀释液依次加入步骤(1)中的细胞培养板孔中，然后进行细胞培养；(5)显色：取步骤(4)培养所得细胞，裂解后采用抗酒石酸酸性磷酸酶检测体系对细胞培养板进行显色反应；(6)测定分析：步骤(5)显色反应完成后，加入NaOH终止液，终止反应，将细胞板内溶液混匀，放入酶标仪，测定显色反应结果，并根据测定结果计算供试品的生物学活性。