[发明专利]一种金针菇单细胞选育优良菌株的方法

摘要

本发明公开了一种金针菇单细胞选育优良菌株的方法，该方法包括接种培养、分离单细胞、接种培养单细胞、培养发菌、出菇和筛选；金针菇品种选育是金针菇产业发展关键之一，而传统金针菇菌种在长期保存过程中，用于菌丝细胞内细胞核分离不一致，造成菌种活力下降，本发明通过单细胞分离可获得细胞核分裂同步的菌种，淘汰细胞核分裂不同步、退化的菌种，从而获得更优良菌种；利用本发明方法筛选出菌株的产量较杂交种高32.9%～39.3%，生育期和产品质量与原菌种一致；本发明方法操作简单、成本低、周期短、适用于工业化大规模生产。

主权项

1.一种金针菇单细胞选育优良菌株的方法，其特征在于，它包括以下步骤：S1.接种培养：在无菌环境下，取出发菌种块，接种于菌丝体培养基中，在20～25℃静置培养5～7d；所述菌丝体培养基每1000ml含有下述重量的原料：酵母粉：5～6g、葡萄糖：20～22g、加水定容至1000ml；S2.分离单细胞：取接种培养后的菌丝体3～5g放入容器中，加入细胞壁溶解酶制剂，在28～34℃下震荡3～4h，过滤收集滤液用硫酸镁溶液稀释至单细胞浓度为1×10³个/ml，得原生质体悬浮液；所述分离酶制剂为溶壁酶溶于0.6mol的MgSO₄溶液；S3.接种培养单细胞：取原生质体悬浮液0.1ml涂抹接种于单细胞培养基表面，置于20～25℃的培养箱中培养8～10d，待单细胞培养基表面生长出白色菌落后，选取单个菌落接种于新的单细胞培养基中，在20～25℃下继续培养，选取具有双核单细胞菌株进行筛选试验；所述单细胞培养基每1000ml含有下述重量的原料：马铃薯：180～200g、蔗糖：100～110g、琼脂：20g、加水定容至1000ml；所述单细胞培养基制备方法为：将马铃薯去皮切成片，放入锅内，加入水1000ml，加热煮沸30分钟，用4层纱布过滤，在滤液中加入琼脂，继续加热煮沸至琼脂完全融化为止，加入蔗糖加热搅拌至蔗糖完全融化，加入水定容至1000ml，取培养基200ml装入300ml的三角瓶内，用封口膜封口，在121℃灭菌处理30min，将无菌培养基倒入无菌培养皿内，培养皿内培养基为20‑25ml，冷却后即可；S4.培养发菌：于无菌环境下在出菇培养基中接种双核单细胞菌株，在20～25℃培养25～30d，长满菌丝体；S5.出菇：将培养发菌后的菌袋移至出菇房内，去除表面菌种，控制出菇房温度为7～15℃、空气相对湿度为90～95%，光照强度为5～10Lx，待子实体生长至3～4cm时，子实体上套塑料筒，塑料筒下端扎口固定，上端扎口并保留直径为2～3cm的透气孔，子实体生长长度至20～22cm时采收；S6.筛选：对单细胞菌种和出发菌种进行菌丝体的生长速度、生育期、产量和产品质量进行比较，筛选出产量高于出发菌种10%以上的单细胞菌种为优良菌种。