[发明专利]一种食用菌富硒多糖的制备方法及应用

摘要

本发明公开了一种食用菌富硒多糖的制备方法及应用，其包括以下步骤：食用菌菌种的活化、食用菌富硒菌种的制备、食用菌发酵液的获取、多糖提取液的超滤与浓缩、超滤膜进行超滤处理、多糖粉末提取、脱蛋白处理、脱蛋白富硒多糖提取，本发明利用食用菌可以很好的提取富硒多糖，提取效率高，利用发酵液进行富硒食用菌发酵，提高了食用菌发酵效率，而在多糖提取之前，利用超滤膜先进行超滤处理，可以防止发酵液内有不良杂质（比如重金属等），在多糖提取时，采用超声波、多次离心，提高了多糖的提取效率，而在去蛋白质时，加入了多种去除蛋白酶，提高了富硒多糖的纯度，保证了保健品的质量。

主权项

一种食用菌富硒多糖的制备方法，其特征在于，其包括以下步骤：（1）食用菌菌种的活化：制备PDA培养基，装入试管内，封口、灭菌，斜摆，制成斜面培养基，在无菌条件下，将冷藏保存的食用菌菌种转接活化，在25℃下进行菌种扩大培养，得到食用菌母种；（2）食用菌富硒菌种的制备：将步骤（1）中的食用菌的菌种，置于富硒的原种培养基中，培养2‑3天，制得食用菌富硒原种；（3）食用菌发酵液的获取：制备富硒发酵液，并对富硒发酵液在常压下进行灭菌，灭菌温度为110℃，灭菌时间为24h，待灭菌后温度降至28℃时，在无菌条件下下接入所述步骤（2）制备的食用菌原种，之后置于30℃下进行发酵，发酵时间为48‑60h，得到含有富硒的多糖发酵液；（4）多糖提取液的超滤与浓缩：将所述步骤（3）得到的多糖发酵液利用超滤膜进行超滤处理，超滤处理的压力为0.2‑0.5Mpa,超滤处理的温度为30‑40℃，之后，将超滤后将被截留的截留液置于70‑80℃下，将其浓缩为原体积的1/8；（5）多糖粉末提取：将所述步骤（4）的浓缩液置于超声波中，进行超声处理30min，然后将超声波处理液置于85℃热水中浸提，浸提时间为4h，之后将浸提液置于高速离心机中进行离心，离心速度为4500rpm，离心时间为20min，收集上清液，加入4‑5倍体积的96%的乙醇，静置16h，再置于5000rpm的离心速度下离心15min，去沉淀，依次用无水乙醇、丙酮和无水乙醚洗涤3‑4次，离心，沉淀真空干燥，得到富硒粗多糖粉末；（6）脱蛋白处理：将所述步骤（5）得到的富硒粗多糖粉末溶解于15倍体积的蒸馏水中，用碳酸钠调节PH至7.8‑8.2，之后加入质量为1/25粗多糖粉末的胰蛋白酶，60℃水解2‑3h，支护用草酸调节PH为5.2‑5.5，加入质量为1/20粗多糖粉末的木瓜蛋白酶，在75℃下水解3‑4h，之后再利用碳酸钠调节ph至7，加入Sevag试剂，并充分振荡混合，静置3‑5h，取上清液，之后置于离心机中离心3min，重复操作，直到不出现蛋白沉淀；（7）脱蛋白富硒多糖提取：将所述步骤（6）得到的上清液中加入3‑6倍体积的96%的乙醇醇析，得到沉淀，将沉淀依次用无水乙醇、丙酮和无水乙醚洗涤后，真空干燥，得到脱蛋白富硒多糖。