[发明专利]一种用于检测节球藻毒素生物毒性的制备方法

摘要

一种用于检测节球藻毒素生物毒性的制备方法，提供一种用于测试水中节球藻毒素生物毒性的检测方法，按如下步骤进行：(1)人脐静脉内皮细胞置于温度为37℃，空气湿度为95％(含5％CO2)的细胞培养箱中，培养于含10‑20％胎牛血清、60μg/mL内皮细胞生长添加剂和1％青霉素‑链霉素双抗的RPMI1640培养液。(2)取传代2‑3代的细胞，分别加入磷酸缓冲液(PBS)为空白样品A,加入节球藻毒素水样为检测样品B，放置于混匀器上震荡2小时；等。该方法运用人脐静脉内皮细胞针对节球藻毒素进行生物毒性检测，最终结果准确、稳定、重现性好，影响因素少，是对现有方法的有效改进，具有较高的实用价值和应用潜力。

主权项

一种用于检测节球藻毒素生物毒性的制备方法，其特征在于，按如下步骤进行：(1)人脐静脉内皮细胞置于温度为37℃，空气湿度为95％的细胞培养箱中，培养于含10‑20％胎牛血清、60μg/mL内皮细胞生长添加剂和1％青霉素‑链霉素双抗的RPMI 1640培养液；(2)取传代2‑3代的细胞，分别加入磷酸缓冲液(PBS)为空白样品A,加入节球藻毒素水样为检测样品B，放置于混匀器上震荡2小时；(3)将样品A和B用PBS洗涤细胞二次，并分别配成浓度为1×105‑1×106cells/mL细胞悬液；(4)A、B样品均加入5μL Annexin V‑FITC混匀后，再加入5μL碘化丙啶(PI)，混匀；室温、避光、反应5‑15min；在1小时内，进行流式细胞仪检测；(5)用流式细胞术检测死细胞、活细胞和凋亡细胞的比例；(6)结果计算：通过流式细胞仪自带软件测出的样品B的凋亡率和死亡率对照空白样品A，判定水质毒性。