[发明专利]一种基于Ag@Au纳米复合材料的电化学免疫传感器的制备方法及应用

摘要

本发明属于纳米功能材料、免疫分析以及生物传感技术领域，提供了一种基于Ag@Au纳米复合材料的电化学免疫传感器的制备方法及应用。采用Ag@Au‑WO2.72/MWCNTs纳米复合材料作为检测抗体标记物，制备的夹心型电化学免疫传感器实现了对多种肿瘤标志物的灵敏检测，具有特异性强，灵敏度高和检出限低等优点，对肿瘤标志物CA724、CA242、CEA、PSA的检测具有重要的科学意义和临床应用价值。

主权项

一种基于Ag@Au纳米复合材料的电化学免疫传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）将直径为3 ~ 5 mm的玻碳电极用Al2O3抛光粉打磨，超纯水清洗干净；（2）取6 µL、1.0 ~ 2.0 mg/mL的金纳米粒子负载的氨基化石墨烯滴加到电极表面，室温下晾干，用超纯水冲洗电极表面，晾干；（3）继续将6 µL、8.0 ~ 12.0 µg/mL的肿瘤标志物捕获抗体Ab1滴加到电极表面，超纯水冲洗，4 ℃冰箱中干燥；（4）继续将3 µL、1.0 ~ 3.0 mg/mL的牛血清蛋白BSA溶液滴加到电极表面，用以封闭电极表面上非特异性活性位点，超纯水冲洗电极表面，4 ℃冰箱中晾干；（5）继续滴加6 µL、1 fg/mL ~ 10 ng/mL的一系列不同浓度的肿瘤标志物抗原溶液到电极表面，超纯水冲洗电极表面，4 ℃冰箱中干燥；（6）将6 µL、2.0 ~ 4.0 mg/mL的Ag@Au‑WO2.72/MWCNTs‑Ab2检测抗体孵化物溶液，滴涂于电极表面上，置于4 ℃冰箱中晾干，制得一种基于Ag@Au纳米复合材料的电化学免疫传感器;所述金纳米粒子负载的氨基化石墨烯的制备，步骤如下：(1) 金纳米粒子溶胶的制备将3.9 ~ 4.2 mL、质量分数为1%的氯金酸HAuCl4和95 mL超纯水加入250 mL的三口烧瓶中，在油浴中加热至沸腾并回流，磁力搅拌下加入9 ~ 11 mL、38.8 mmol/L的柠檬酸钠溶液，持续搅拌并回流15 ~ 25 min，至溶液变为酒红色并不再改变， 将溶液室温下冷却，制得金纳米粒子的溶胶；(2) 氨基化石墨烯的制备将90 ~120 mg氧化石墨烯分散在40 mL乙二醇中，超声30 min，加入1 mL的浓氨水，待悬浊液变为棕黑色后将其转移到聚四氟乙烯反应釜中，在180 ℃下反应10 ~ 15 h；冷却至室温,用超纯水和乙醇各洗涤三次，放于60 ℃的干燥箱中干燥10 h，制得氨基化石墨烯；(3)负载金纳米粒子的氨基化石墨烯的制备将8 ~12 mg氨基化石墨烯加入到上述步骤（1）所制得的金纳米粒子溶胶中，搅拌3 h，离心除去上清液，制得负载金纳米粒子的石墨烯。