[发明专利]基于HRP标记适体传感器的OTA化学发光检测方法

摘要

本发明提供了一种基于辣根过氧化酶标记适体传感器的OTA化学发光检测方法，该技术方案基于核酸适配体的高亲和性，利用OTA与报告序列竞争结合OTA适体，从而得到了待测OTA浓度与磁性微球表面报告序列固定量的负相关关系。最后通过对磁性微球表面固定的报告序列进行HPR标记，以HRP作为检测探针进行化学发光检测。利用HRP催化鲁米诺体系产生化学发光的原理，建立磁性微球表面HRP固定量与化学发光强度的对应关系，在保证检测精度的基础上拓宽了适用的OTA浓度范围。

主权项

1.基于HRP标记适体传感器的OTA化学发光检测方法，其特征在于包括以下步骤：1)取磁性微球，利用0.05～0.2M的咪唑缓冲溶液洗涤，而后取固相重悬于含有EDC的咪唑缓冲溶液中，于35～39℃震荡孵育15～25min，而后以磁性微球与氨基修饰的OTA适体用量比为2μg:(1～2)pmol的比例加入氨基修饰的OTA适体，于35～39℃震荡反应50～70min，得到磁性微球‑OTA适体复合物；2)向步骤1)所得的磁性微球‑OTA适体复合物中加入待测样品，于35～39℃条件下震荡50～70min，取固相利用PBST缓冲溶液洗涤，取固相与含有生物素化的报告序列的BA杂交液混合，在35～39℃震荡反应50～70min，取固相利用PBST缓冲溶液洗涤；3)取固相与稀释倍数为1:10000的SA‑HRP溶液混合后在35～39℃条件下震荡50～70min，取固相即得到辣根过氧化酶标记的适体传感器；4)将步骤3)所述辣根过氧化酶标记的适体传感器与HRP化学发光底物混匀，而后检测发光信号CL值。