[发明专利]一种生产复合类胡萝卜素的基因工程菌及其构建方法和应用

摘要

本发明公开了一种生产复合类胡萝卜素(α‑胡萝卜素、β‑胡萝卜素、δ‑胡萝卜素和番茄红素)的基因工程菌及其构建方法和应用。本发明将香蕉番茄红素ε‑环化酶基因与表达载体连接，然后转化到含有LYC‑LCYB1质粒的工程菌中，得到生产复合类胡萝卜素的基因工程菌，所述的香蕉番茄红素ε‑环化酶基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。利用本发明的基因工程菌可直接从菌体中获得含高比例的α‑胡萝卜素的复合类胡萝卜素，具有良好的应用前景。

主权项

1.一种复合类胡萝卜素的制备方法，其特征在于，将生产复合类胡萝卜素的基因工程菌接种到LB液体培养基中，28℃振荡培养3d，得到发酵培养物，离心，收集菌体，然后用体积比为2:1的氯仿‑甲醇进行萃取，收集下层有机相，干燥该有机相后得到复合类胡萝卜素；所述的生产复合类胡萝卜素的基因工程菌是通过以下方法构建的，将香蕉番茄红素ε‑环化酶基因与表达载体连接，然后转化到含有LYC‑LCYB1质粒的工程菌中，得到生产复合类胡萝卜素的基因工程菌，所述的香蕉番茄红素ε‑环化酶基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述的LYC‑LCYB1质粒是通过以下方法构建的：利用上游引物MaLCYBF：5’‑TATCATCGATAAGCTTATGGATACGCTGCTTAGAAC‑3’和下游引物MaLCYBR：5’‑TACCGCATTAAAGCTTCTAATTTTTCTCTCGTAGC‑3’PCR扩增香蕉cDNA，得到香蕉番茄红素β‑环化酶基因MaLCYB；将其利用同源重组酶连接到经HindIII限制性内切酶切好的pAC‑LYC载体上，得到LYC‑LCYB1质粒；所述的表达载体为表达载体pBluescript SK，所述的含有LYC‑LCYB1质粒的工程菌为含有LYC‑LCYB1质粒的大肠杆菌DH5α。