[发明专利]一种建立康乃馨农杆菌介导高效转染体系的方法在审
| 申请号： | 201610705782.8 | 申请日： | 2016-08-23 |
| 公开（公告）号： | CN107779469A | 公开（公告）日： | 2018-03-09 |
| 发明（设计）人： | 颜笑洒;生承晔;张业胜;董扬 | 申请（专利权）人： | 云南纳博生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/82 | 分类号： | C12N15/82;A01H5/00;A01H4/00;A01H6/30 |
| 代理公司： | 昆明今威专利商标代理有限公司53115 | 代理人： | 赛晓刚 |
| 地址： | 650502 云南*** | 国省代码： | 云南;53 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种建立康乃馨农杆菌介导高效转染体系的方法，所述方法包括以下步骤步骤(1)种子萌发无菌苗阶段；步骤(2)无菌苗扩繁阶段；步骤(3)农杆菌培养阶段；步骤(4)侵染和共培养阶段；步骤(5)筛选阶段；步骤(6)生根阶段和步骤(7)阳性检测阶段。本发明顺利建立了康乃馨农杆菌介导高效转染体系，为进一步利用转基因技术培育康乃馨新品种作出了充分准备，进而可以获得传统育种方式无法培育的新品种；在本发明提供的方法中，愈伤组织诱导率高，保存效果好，为遗传转化提供良好受体；转化效率高，适合大规模工业生产和商业育种。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 建立 康乃馨 杆菌 高效 转染 体系 方法 | ||
【主权项】：
一种建立康乃馨农杆菌介导高效转染体系的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：步骤(1)种子萌发无菌苗阶段：将康乃馨种子消毒灭菌后半嵌接种于基础培养基中培养成无菌苗；步骤(2)无菌苗扩繁阶段：将步骤(1)中萌发长到3～10cm的无菌苗切成带有叶节的小段，把叶节接入到基础培养基中；步骤(3)农杆菌培养阶段：将农杆菌加入到同时添加了卡那霉素和利福平的YM培养基中进行培养；步骤(4)侵染和共培养阶段：将步骤(2)获得的无菌苗切成2～7mm2的叶片块放入三角瓶中，向三角瓶中倒入步骤(3)获得的农杆菌菌液，三角瓶口密封，抽真空侵染，倒去菌液，将叶片晾干，转接到共培养基中进行暗培养得到愈伤组织，共培养基上垫有滤纸；所述共培养基成分如下：SH基础配方+TDZ 0.01～2.0mg·L‑1+IBA 0.1～2.0mg·L‑1+蔗糖20～60g·L‑1+葡萄糖10～60g·L‑1+琼脂8～16g·L‑1+AS 50～200μmol·L‑1；共培养基pH 5.2～5.8，118～125℃灭菌20‑30min；步骤(5)筛选阶段：将步骤(4)获得的进行两次筛选，培养得到幼芽；步骤(6)生根阶段：将步骤(5)中获得的幼芽转接到生根培养基培养，得到抗性苗；步骤(7)阳性检测阶段：取抗性苗的叶片，提取DNA，进行PCR扩增，将PCR产物进行凝胶电泳，得到农杆菌成功侵染康乃馨的阳性苗，建立康乃馨农杆菌介导高效转染体系。
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